[发明专利]一种弧菌数量检测的试剂盒及其制备方法、检测方法

权利要求书

1.一种弧菌数量检测的试剂盒，其特征在于，包括弧菌稀释液和固体培养基；

所述弧菌稀释液为0.009g/ml的氯化钠溶液；

所述固体培养基的配方为：酵母膏3-5g、蛋白胨6-10g、蔗糖12-20g、硫代硫酸钠6-10g、柠檬酸钠6-10g、牛胆酸钠1.8-3g、牛胆粉3-5g、氯化钠6-10g、柠檬酸铁0.6-1g、2%溴麝香草酚蓝溶液12-20ml、1%麝香草酚蓝溶液2.4-4ml、琼脂9-15g。

2.一种弧菌数量检测的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括装有如权利要求1所述弧菌稀释液的离心管的制备，以及装有如权利要求1所述的固体培养基的培养皿的制备；

A、装有所述弧菌稀释液的离心管的制备包括以下步骤：

A1：称取9g的氯化钠倒入已装入800ml的蒸馏水的烧杯中，搅拌均匀；

A2：在烧杯中倒入盐酸或氢氧化钠，将烧杯中的溶液PH值调整到8.5-8.7，再用蒸馏水定容至1000ml，配制成弧菌稀释液；

A3：通过可调试分离器将步骤A2配制的弧菌稀释液注入离心管内；

A4：将装有弧菌稀释液的离心管灭菌后，旋紧离心管的管盖，放入真空包装袋内抽真空；

B、装有所述固体培养基的培养皿的制备包括以下步骤：

B1：取酵母膏3-5g、蛋白胨6-10g、蔗糖12-20g、硫代硫酸钠6-10g、柠檬酸钠6-10g、牛胆酸钠1.8-3g、牛胆粉3-5g、氯化钠6-10g、柠檬酸铁0.6-1g、2%溴麝香草酚蓝溶液12-20ml、1%麝香草酚蓝溶液2.4-4ml、琼脂9-15g倒入装有1100ml蒸馏水的三角烧瓶中，搅拌均匀；

B2：把步骤B1的三角烧瓶在加热炉上煮沸，制成培养液，并倒入盐酸或氢氧化钠，将三角烧瓶中的溶液PH值调整到8.5-8.7；

B3：将步骤B2制得的培养液灭菌后，冷却至55℃-65℃；

B4：在超净台内对自动分液器的储液漏斗消毒，然后将步骤B3冷却至55℃-65℃的培养液分装到培养皿中；

B5：将培养皿平放于超净台上，并打开超净台紫外灯，使培养液冷却凝固成固体培养基；

B6：凝固后，在超净台内，将培养皿的盖子盖上，倒扣后将培养皿取出，放入真空包装袋抽真空。

3.如权利要求2所述的弧菌数量检测的试剂盒的制备方法，其特征在于，

在装有所述弧菌稀释液的离心管的制备过程中，往每个离心管内加入0.9ml的弧菌稀释液，每个真空包装袋装有2支离心管；

在装有所述固体培养基的培养皿的制备过程中，用90mm的培养皿接住20ml培养液，每个真空包装袋含有1块装有固体培养基的培养皿。

4.一种使用权利要求3提供的弧菌数量检测的试剂盒进行弧菌数量检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

C1：将手、剪刀和解剖容器清洗干净，并用75%医用酒精、水煮或火烧等形式对剪刀和解剖容器进行消毒；

C2：选正常或濒死鱼虾等个体，清水洗净解剖部位；用剪刀解剖，剪取0.1g的典型病灶直接放入装有弧菌稀释液的离心管，并旋紧离心管管盖；

或取0.1ml水样滴入装有弧菌稀释液的离心管内，并旋紧离心管管盖；

C3：用力振荡离心管数次，进行第一次稀释；然后吸取2滴第一次稀释液加入另一未加病灶或水样的装有弧菌稀释液的离心管，用力振荡离心管数次，进行第二次稀释；

C3：吸取第二次稀释液，滴加在装有固体培养基的培养皿中心部位，然后用涂布棒在固体培养基上将液体涂抹均匀；

C5：将培养皿敞盖平放晾干，至表面基本干燥，然后盖上培养皿的盖子后倒扣，静置于温度在20度以上的地方8-15小时。