[发明专利]一株产生磷脂酶的枯草芽孢杆菌诱变菌株

说明书

一株产生磷脂酶的枯草芽孢杆菌诱变菌株。本发明提供了一种分离的表达磷脂酶C的菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8500。利用本发明所提供菌株和制备方法制备所得的磷脂酶C可以用于油脂精炼，脱胶效果良好，可以广泛应用于油脂精炼、添加剂、医药等领域。

技术领域

本发明属于酶法脱胶领域，具体说是一株产生磷脂酶的枯草芽孢杆菌诱变菌株。

背景技术

磷脂酶（Phospholipase，PL)是生物体内存在的能水解甘油磷脂的酶，水解产物为各种磷脂酸和氨基醇，如胆胺、胆碱、丝氨酸、乙醇胺等。根据磷脂酶水解甘油磷脂的位点（Sehmiel DH，Miller VL.Bacterial Phospholipases and Pathogenesis[J].Microbesand Infection，1999，1:1103-1112）不同，可将磷脂酶分为磷脂酶A(phospholipase A，PLA)、磷脂酶B(Phospholipase B，PLB)、磷脂酶C(Phospholipase C，PLC)和磷脂酶D（Phospholipase D，PLD)。磷脂酶C作用于3位磷酸酯键，产物为甘油二酯、磷酸胆碱或磷酸乙醇胺等。

磷脂酶可广泛应用于油脂精练、磷脂改性、饲料改良剂、食品工业和医药等方面。脱胶是植物油精炼过程中的一个重要环节，对提高油的品质至关重要，脱胶主要是脱除磷脂，脱胶若不彻底，会影响油品的深加工和油品的稳定性，减低油品货架期。酶法脱胶可以克服传统脱胶方法脱胶脱除率低，同时中性油损失高等的问题。而在酶法脱胶工艺中，现有文献多报道磷脂酶PLA用于植物油脱胶。磷脂酶PLA(包括PLA1和PLA2)，脱胶后可产生极性溶血磷脂和极性脂肪酸，PLA脱胶工艺仅仅损失油中总的磷脂分子，来减少精炼损耗。而磷脂酶PLC酶通过选择性水解磷酸酯官能团与磷脂反应，生成甘油二酯（DAG）和磷脂酸基团，甘油二酯不需要被除去，所以PLC脱胶工艺通过保留原始的磷脂分子而仅去除磷酸酯官能团来减少精炼损耗，不存在PLA脱胶工艺中产生的能提高脱胶油酸价的极性脂肪酸的问题，PLC用于脱胶优势明显好于PLA。

使用PLC进行脱胶，既可以使用PLC酶，也可以直接使用磷脂酶C产生菌株的发酵液。直接使用高酶活的发酵液，可免除繁杂的纯化步骤，提高酶的利用率，大幅降低生产成本。但现有磷脂酶C产生菌株，大多为致病性菌株，因此无法直接使用现有的磷脂酶C产生菌株对油脂进行脱胶。因此，寻找磷脂酶C酶活高的GRAS（美国FDA评价食品添加剂的安全性指标）菌株成为解决该问题的一个关键因素。

发明内容

本发明的一个目的在于，提供一种分离的表达磷脂酶C的菌株。

本发明提供的分离的表达磷脂酶C的菌株，命名为WBRD01281-D，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8500。

本发明还有一个目的在于，提供一种生产磷脂酶C的方法。

本发明提供的生产磷脂酶C的方法包括：培养前述的菌株以使所述菌株或细胞生产磷脂酶C，收获磷脂酶C。

在本发明的一个优选实施例中，所述培养为在适宜所述菌株生长和/或适宜所述菌株表达磷脂酶C的条件下培养所述菌株，优选的，所述培养为在适宜所述菌株生长的条件下培养所述菌株，以增加所述菌株数量，然后再于适宜所述菌株表达磷脂酶C的条件下培养所述菌株，以表达所述磷脂酶C。

在本发明的一个优选实施例中，所述培养为在25-40℃、120-250rpm培养所述菌株6-24h。

在本发明的一个优选实施例中，所述收获包括分离和收集含有分泌或释放到胞外的磷脂酶C的培养物上清液，由此获得含有磷脂酶C的磷脂酶C酶液；优选地，所述方法还包括对所述磷脂酶C酶液进行浓缩。

本发明还有一个目的在于，提供一种磷脂酶C。