[发明专利]一种测定卷烟烟丝及其主流烟气中淫羊藿有效成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及淫羊藿有效成分的含量检测方法，特别是测定卷烟烟丝及其主流烟气中淫羊藿有效成分含量测定方法，属于烟草检测技术领域。 

背景技术

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.、或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分，具有补肾阳，强筋骨，祛风湿之功效。用于阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛。 

随着全球性控烟运动的不断推进，社会公众对于吸烟与健康问题日益关注，有观点认为，在卷烟中加入天然植物的有益成分能够降低卷烟烟气对人体危害，国内部分研究通过在卷烟添加淫羊藿提取物试图降低吸烟引起的危害。中国专利“一种用于卷烟的保润增香添加剂及其制备方法和应用”（CN201210227599.3）和“一种天然植物烟用减害添加剂及其制备方法和应用”（CN201210227591.7）显示，含淫羊藿成分的天然植物萃取液添加于卷烟后可以有效增加卷烟的香气量，改善香气质和协调性，减少杂气与刺激性，增加甜润感，使余味更干净、舒适，整体提升了卷烟的内在品质；与对照卷烟相比可减轻卷烟烟气对人呼吸道上皮细胞的损伤、逆转在动物烟气暴露30天引起的血红蛋白下降，血小板数量增加状况、逆转卷烟烟气引起的动物咳嗽潜伏期降低，咳嗽次数增加等症状、逆转卷烟烟气引起的动物酚红排泌量降低症状，体现一定减轻卷烟烟气危害作用。 

淫羊藿功效与其主要的有效成分密切相关，淫羊藿主要有效成分为淫羊藿苷（Icariin）和淫羊藿定c（Epmedin C），淫羊藿苷具有改善心脑血管功能、调节内分泌及性腺功能、促进成骨细胞的增殖和发育、增强免疫功能、抗肿瘤等多重药理学作用；淫羊藿定c具有显著的抗炎镇痛作用，两种成分既是淫羊藿的主要有效成分，也是其主要质控成分。而这些有效成分的含量较低，尤其是在燃烧之后，这些有效成分可能经热裂解、化学反应等产生变化，卷烟主流烟气中的含量更低。目前天然药物制剂中淫羊藿有效成分的检测方法主要为高效液相色谱法，在烟草行业也有文献报道采用HPLC方法检测添加淫羊藿提取物卷烟主流烟气中的淫羊藿苷，而烟气中淫羊藿定c的检测尚未见报道。液相色谱法可实现两种有效成分含量测定，但灵敏度较低、自身抗干扰能力较弱，在分析低含量样品时，易出现定量不准确或无法定量。高效液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用法（HPLC-ESI-MS）是当今药物定量分析研究 强有力的工具，具有灵敏度高，专属性好，样品处理简单，分析快速等优点，对检测卷烟烟气中天然植物有效成分具有相当优势。 

发明内容

本发明主要针对液相色谱法在含量低的情况下测定淫羊藿有效成分方面的不足之处，特别是针对尚未有检测卷烟烟气中淫羊藿定c含量报道的情况，提供了一种测定卷烟及主流烟气中淫羊藿主要有效成分含量的方法。该方法能实现卷烟及主流烟气中淫羊藿主要有效成分的快速、准确定量分析。 

本发明的目的是通过以下技术方案实现的。 

一种测定卷烟烟丝及其主流烟气中淫羊藿有效成分的检测方法，所述淫羊藿有效成分包括淫羊藿苷和淫羊藿定c，其特征在于：该方法利用高效液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用法（HPLC-ESI-MS），分别对卷烟烟丝及卷烟主流烟气中淫羊藿苷和淫羊藿定c的含量进行检测，依次包括以下步骤： 

（1）卷烟烟支的挑选和平衡：将卷烟烟支于22℃±1℃和RH60%±2%下平衡48h； 

（2）制备对照品溶液：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加35-75%醇溶液制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；取淫羊藿定C对照品适量，精密称定，加35-75%醇溶液制成每1ml含0.1mg的溶液，即得； 

（3）制备卷烟烟丝样品溶液：取10-20支平衡后样品烟的烟丝，精密称定，精密加入35-75%的醇溶液100-200ml，提取20-60min，用35-75%醇溶液补足重量，摇匀，过0.22um微孔滤膜，即得； 

（4）制备卷烟主流烟气中样品溶液：取平衡后的卷烟，在22℃±2℃和RH60%±5%的环境中和标准条件下，用吸烟机抽吸卷烟样品，用剑桥滤片捕集烟气粒相物，每张滤片捕集20支烟的烟气；吸毕，取出样品烟滤片一份，精密加入35-75%醇溶液30-100ml，提取20-60min，用35-75%醇溶液补足重量，摇匀，过0.22um微孔滤膜，即得；