[发明专利]检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学发光酶联免疫技术检测领域，尤其涉及检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒及其制备方法。

背景技术

脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）是磷酸脂酶A2超家族中的非钙离子依赖型磷酸脂酶，最初发现其可以降解血小板活化因子，曾被称为血小板活化因子乙酰水解酶。l995年首次被克隆，其编码基因(PLA2G7)，有12个外显子，染色体定位于6p21.2212，由441个氨基酸残基组成的一种丝氨酸脂酶，相对分子质量为50×10³(50kDa)。Lp-PLA2以生物膜磷脂为天然底物优先作用于氧化磷脂sn22位上短脂酰链中的酯键，使水溶性强的磷脂产生游离脂肪酸和溶血磷脂参与磷脂的代谢。

循环中Lp-PLA2主要来源于血细胞，如单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞和肥大细胞受炎症刺激时少量分泌，并受炎性介质的调节，如γ2干扰素和脂多糖抑制其分泌，血小板活化因子促进其分泌。联合应用原位杂交和免疫组织化学技术研究发现，兔和人动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞可表达更高水平的Lp-PLA2mRNA和蛋白。人血浆中的Lp-PLA2与脂蛋白颗粒结合的形式存在，其中2/3与低密度脂蛋白(1ow density lipop rotein,LDL)结合，主要是小而密的LDL结合，其中带负电荷的LDL中的Lp-PLA2含量和活性更高，促进内皮细胞趋化因子释放，促进炎症反应。1/3与高密度脂蛋白(high density lipop rotein,HDL)和极低密度脂蛋白(very low density lipop rotein,VLDL)结合。Lp-PLA2与人类HDL结合少的原因，可能是由于人Lp-PLA2氨基端的高度糖基化阻碍了其与HDL的结合。

目前实验研究及流行病学研究结果揭示了Lp-PLA2生成多种促炎产物，参与从动脉粥样斑块形成到斑块不稳定的各个阶段，具有促进炎症反应作用，可能成为新的心脑事件独立预测因子。血浆Lp-PLA2测量是一个有价值的方法，可用来鉴别或预测具有心脑血管疾病高风险事件的个体。

目前为止，没有见到利用Lp-PLA2与心脑血管疾病之间的相关关系来制备检测人Lp-PLA2的水平的试剂盒的报道。

发明内容

本发明根据上述领域存在的空白和需求，提供了检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒及其制备方法。

本发明的一个目的是提供检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒。

本发明所提供的检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒，包括包被有抗脂蛋白相关磷脂酶A2单克隆抗体的化学发光板，还包括样品处理液；所述样品处理液主要由A液和B液组成；所述A液含有7.5g/L氯化铵、1.2g/L酪蛋白和1.2g/L硬脂酸钠；所述B液含有0.5M Tris-Hcl，PH7.6。

所述试剂盒还包括样品稀释液；所述样品稀释液由如下方法制备得到：将100ml山羊血清、20ml重量百分比浓度为1%的硫柳汞、10ml0.1M铁氰化钾、0.5ml吐温-20、10ml10mg/ml的庆大霉素、以及余量为PH7.40.01M PBS缓冲液定容至1000ml，即得到所述样品稀释液。

所述试剂盒还包括浓缩洗涤液；所述浓缩洗涤液由如下方法制备得到：将2.96gNaH₂PO₄·2H₂O、29g Na₂HPO₄·12H₂O、234g NaCl和20ml吐温-20，加双蒸水定容至1000ml，即得到浓缩洗涤液。

所述试剂盒还包括化学发光底物液；所述化学发光底物液由化学发光底物液R1和化学发光底物液R2组成；所述化学发光底物液R1为3.0mmol/L鲁米诺与0.3mmol/L对碘苯酚的混合液；化学发光底物液R2为7.5mmol/L的双氧水。

所述试剂盒还包括标准品溶液；所述标准品溶液为6个浓度梯度的脂蛋白相关磷脂酶A2抗原，所述浓度依次为：0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、250ng/ml、500ng/ml和1000ng/ml。

所述试剂盒还包括高值对照液和低值对照液；所述高值对照液或低值对照液由向胎牛血清中添加重组脂蛋白相关磷脂酶A2制备得到；所述高值对照的终浓度为700ng/ml；所述低值对照的终浓度为300ng/ml。

本发明的另一个目的是提供所述检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒的制备方法。