[发明专利]检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒，包括包被有抗脂蛋白相关磷脂酶A2单克隆抗体的化学发光板，其特征在于：还包括样品处理液；所述样品处理液主要由A液和B液组成；所述A液含有7.5g/L氯化铵、1.2g/L酪蛋白和1.2g/L硬脂酸钠；所述B液含有0.5M Tris-Hcl，PH7.6。

2.根据权利要求1所述的检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括样品稀释液；所述样品稀释液由如下方法制备得到：将100ml山羊血清、20ml重量百分比浓度为1%的硫柳汞、10ml0.1M铁氰化钾、0.5ml吐温-20、10ml10mg/ml的庆大霉素、以及余量为PH7.40.01M PBS缓冲液定容至1000ml，即得到所述样品稀释液。

3.根据权利要求2所述的检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括浓缩洗涤液；所述浓缩洗涤液由如下方法制备得到：将2.96gNaH₂PO₄·2H₂O、29g Na₂HPO₄·12H₂O、234g NaCl和20ml吐温-20，加双蒸水定容至1000ml，即得到浓缩洗涤液。

4.根据权利要求3所述的检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括化学发光底物液；所述化学发光底物液由化学发光底物液R1和化学发光底物液R2组成；所述化学发光底物液R1为3.0mmol/L鲁米诺与0.3mmol/L对碘苯酚的混合液；化学发光底物液R2为7.5mmol/L的双氧水。

5.根据权利要求4所述的检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括标准品溶液；所述标准品溶液为6个浓度梯度的脂蛋白相关磷脂酶A2抗原，所述浓度依次为：0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、250ng/ml、500ng/ml和1000ng/ml。

6.根据权利要求5所述的检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括高值对照液和低值对照液；所述高值对照液或低值对照液由向胎牛血清中添加重组脂蛋白相关磷脂酶A2制备得到；所述高值对照的终浓度为700ng/ml；所述低值对照的终浓度为300ng/ml。

7.权利要求1-6中任一所述检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光酶联免疫试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

（1）制备抗体包被液：0.36g NaH₂PO₄·H₂O，3.10g Na₂HPO₄·2H₂O，定容至1L，pH7.6；

（2）包被；

（3）封闭；

其特征在于：还包括制备样品处理液的步骤：将7.5g氯化铵、1.2g酪蛋白和1.2g硬脂酸钠，加入纯化水定容1L，即得到A液；PH7.6、0.5M Tris-HCl溶液为B液；将所述A液和B液分别独立包装，即得到所述样品处理液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述包被的条件为2-8℃、18-24小时。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述封闭的条件为4℃封闭12小时。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述封闭采用的封闭液由如下方法制备得到：向PH值为7.0-7.5、浓度为10mM的Tris缓冲液中加入质量百分比终浓度2%的苏氨酸、质量百分比终浓度1%的蔗糖、质量百分比终浓度0.5%的β-巯基乙醇。