[发明专利]一种建立急性病毒性肝炎动物模型的方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及肝脏免疫学和实验动物学技术领域，具体涉及一种建立急性病毒性肝炎动物模型的方法。

【背景技术】

肝炎是严重危害人民生命健康且死亡率较高的一种疾病，病因主要包括病毒感染、过度酒精摄入和服入化学毒物等造成肝脏实质细胞的破坏，其致病机制复杂。由于人体肝脏标本的缺乏以及体外研究的局限性，建立实验性肝脏损伤动物模型，模拟人类肝脏疾病，研究肝炎的发病机制，筛选治疗肝炎的药物，具有十分重要的现实意义。

其中肝脏免疫损伤备受关注，特别是肝脏淋巴细胞参与的病理损伤已经成为多种肝炎发病机制中至关重要的因素，现有技术中公开了由刀豆蛋白（concanavalin A）诱导的肝炎模型，该模型将刀豆蛋白以15微克/克体重（μg/g.wt）静脉注射小白鼠，导致T细胞依赖的肝损伤；现有技术中还公开了自然杀伤T细胞，即NKT细胞，通过Fas配体介导的细胞毒活性参与刀豆蛋白诱导的肝炎模型；以及巨噬细胞（肝脏内的Kupffer细胞）通过分泌肿瘤坏死因子TNF参与刀豆蛋白诱导的肝炎模型。

现有技术中的肝炎模型多为化学性损伤或免疫损伤，都无法很好的模拟病毒性感染引起的肝炎，因此无法指导病毒性肝炎的临床研究及药物的开发，而我国乙肝、甲肝、丙肝发病率居高，急需要病毒性肝炎模型支持对病毒性肝炎治疗的研究。因此，现有技术中公开了D-氨基半乳糖与微量细菌脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）共处理引起肝脏损伤的动物模型，该模型中D-氨基半乳糖与LPS处理小白鼠后，小白鼠对LPS敏感性明显增强，引起小白鼠急性肝脏损伤，伴有严重肝脏充血和坏死，甚至出现死亡，LPS可以通过与Toll样受体2、4结合，刺激淋巴细胞分泌炎性淋巴因子，引起肝脏局部炎症。

上述D-氨基半乳糖与LPS协同使用，虽然可以模拟病毒性肝炎，但该模型中LPS可刺激多种Toll样受体，且诱导较慢，也无法模拟病毒性感染引起的急性肝损伤。

因此，建立出一种模拟效果好的急性病毒性肝炎动物模型成为亟待解决的问题。

【发明内容】

本发明的目的在于克服上述不足之处，提供一种建立急性病毒性肝炎动物模型的方法，解决现有技术中模拟病毒性感染引起的急性肝损伤效果不佳的技术问题。

本发明为解决上述技术问题所采用的方案如下：

一种建立急性病毒性肝炎动物模型的方法，包括以下步骤：

步骤1：从纯系小白鼠（纯系BALB/c小鼠）、纯系B6小鼠（纯系C57BL/6J小鼠）、纯系严重联合免疫缺陷病（SCID）小鼠、纯系裸鼠（纯系BALB/c背景的裸鼠）或纯系分化抗原1d（CD）缺陷小鼠（纯系BALB/c背景的小鼠）中选择至少一组小鼠；

步骤2：用无菌磷酸缓冲溶液（PBS溶液）配制D-氨基半乳糖溶液，用无菌磷酸缓冲溶液配制多聚肌苷酸:多聚胞苷酸溶液；

步骤3：对步骤1所选的每组纯系小鼠分别注射D-氨基半乳糖溶液和多聚肌苷酸:多聚胞苷酸溶液，其中，D-氨基半乳糖每克体重剂量范围是0.15～0.5mg，多聚肌苷酸:多聚胞苷酸每克体重剂量范围是0.03～0.5μg；

步骤4：D-氨基半乳糖溶液和多聚肌苷酸:多聚胞苷酸溶液腹腔注射或静脉注射后6～24小时，收集血液后分离血清，检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性，结果为300～800U/L，则急性病毒性肝炎动物模型建立成功。

优选地，所述步骤1中所选的为6～8周龄的纯系小白鼠。

优选地，所述步骤2中的D-氨基半乳糖溶液终浓度为15～30μg/μl，多聚肌苷酸:多聚胞苷酸溶液终浓度为5～10ng/μl。

优选地，所述步骤3中D-氨基半乳糖每克体重剂量是0.5mg，多聚肌苷酸:多聚胞苷酸每克体重剂量范围是0.03μg。

优选地，所述步骤4收集血清的时间为D-氨基半乳糖溶液和多聚肌苷酸:多聚胞苷酸溶液注射后12～18小时。

优选地，所述步骤4除检测血清丙氨酸转移酶活性外还包括检测血清天冬氨酸转移酶（AST）活性；以及收集小鼠肝脏标本，显微镜下观察肝脏组织学变化；血清丙氨酸氨基转移酶活性和天冬氨酸转移酶活性均为300～800U/L，肝脏组织学出现肝细胞点状坏死，则急性病毒性肝炎动物模型建立成功。

优选地，所述步骤4中D-氨基半乳糖溶液的注射方式为腹腔注射，多聚肌苷酸:多聚胞苷酸溶液的注射方式为尾静脉注射。