[发明专利]一种体外诱导扩增NKT细胞的方法

权利要求书

1.一种体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：

a.改造白血病细胞株K562，使其表达CD1d、anti-CD28 MAb，用淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞，采用RT-PCR方法分别从人PBMC中扩增CD1d、anti-CD28MAb cDNA,测序正确后，CD1d、anti-CD28MAb基因分别克隆至含有不同筛选标记的2种真核表达载体，先后转染K562细胞，筛选稳定表达的细胞克隆，构建K562稳定细胞株K562-CD1d-anti-CD28MAb；

b.用100Gy γ射线辐照K562稳定细胞株，用含有IL-2、IL-15和α-Galcer的培养基调整人外周血单个核细胞浓度至1×10⁶/ml，两种细胞混匀后置于37℃、5%的CO₂培养箱中培养；每3～4天进行补液及传代，第12天收获细胞。

2.如权利要求1或2或3所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的培养基的为RPMI 1640加入10%人血清或10%胎牛血清；或AIM-V加入10%人血清或10%胎牛血清。

3.如权利要求3所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的K562稳定细胞株浓度∶外周血单个核细胞=1-4∶1。

4.如权利要求3所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的IL-2的浓度为50U/ml。

5.如权利要求3所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的IL-15的浓度为50ng/ml。

6.如权利要求3所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的α-Galcer的浓度为50ng/ml-500ng/ml。