[发明专利]一种醇沉竹节参多糖及其制备方法与它的用途

说明书

【技术领域】

本发明属于疫苗佐剂技术领域。更具体地，本发明涉及一种醇沉竹节参多糖，还涉及所述醇沉竹节参多糖的制备方法，还涉及所述醇沉竹节参多糖的用途。

【背景技术】

竹节参系五加科人参属植物竹节参的干燥呈竹鞭状根茎，为我国的名贵特产少常用的中药材之一。竹节参多生长在海拔1000m以上的阔叶疏林阴湿地或岩石、沟涧旁边，对土壤条件要求较高，适宜在中性或微酸性环境中生长，喜腐殖质层厚、疏松肥沃、排水良好的沙壤土。在云南、贵州、四川、湖北、陕西、甘肃、河南、浙江、安徽、江西等省民间有较长的应用历史，还有少量出口香港。有滋补强壮，散瘀止痛，止血祛痰的功效，也是土家族著名民族药，一直被湖北恩施土家族先民奉为“草药之王”。随着现代药理学研究深入，竹节参的主要功效已经逐步地体现在某一类成分，甚至到某种成分上。竹节参的主要有效成分为竹节参皂苷和多糖类。

在现有技术中也记载了竹节参多糖的制备方法，例如CN101265302B以及CN101265301B记载了竹节参多糖的制备方法，但是使用该方法制备得到的竹节参多糖仅能用于简单药物和保健品之中，这些专利仅提及了竹节参多糖增强免疫力的功效，只是简单的体外增加淋巴细胞增殖活性，并未对其具体作用（疫苗佐剂）进行研究，更没有阐明用于疫苗佐剂。虽然大量研究结果显示，竹节参多糖能够明显增强机体的免疫调节功能，但是作为疫苗佐剂的研究并未见报道，而且用于疫苗佐剂的竹节参多糖在制备方法和产品的选择上具有更加严格的要求。

传统的疫苗一般多为全菌或全病毒制成，含有大量的非特异免疫原性物质，既有疫苗成分，也有佐剂作用，一般不需加佐剂。目前，用于人用疫苗的佐剂为铝盐佐剂(主要是氢氧化铝及其磷酸盐，Alum)。铝盐佐剂作为人类疫苗佐剂已使用了几十年，成为人用疫苗中常用的佐剂，具有良好的佐剂效果。随着新型疫苗的不断出现，铝盐佐剂显现出一些问题，其中包括：(1)因其理化性质特点，铝盐疫苗冷冻后胶体状态被破坏，因此不能冷冻干燥和在低温状态下运输，但现在的很多多肽疫苗必须要低温保存。(2)因含盐量高，贮存日久有结晶沉淀，使制备的疫苗稳定性得不到保障。(3)铝盐对人、畜的神经系统可能有影响。(4)在注射部位有时会发生局部无菌性脓肿，甚至可以形成肉芽肿，轻度局部反应较为常见。(5)对肿瘤疫苗不适合，以铝盐佐剂作疫苗主要适用于以抗体为保护性免疫的疫苗。(6)铝盐佐剂释放抗原物质的速度缓慢，效应也比较弱，对许多可溶性抗原都不够有效，对抗原的要求比较高。因此研究新型疫苗佐剂是制备新型疫苗的重要环节。

正在开发的新型疫苗如基因工程疫苗、核酸疫苗等具有良好的抗原特异性和低毒性，但免疫原性较差，尤其需要佐剂来增强其免疫原性及宿主对抗原的保护性应答。中药活性成分多糖属于天然物质，毒副作用小，取材广泛，开发新型中药佐剂是佐剂研究发展的重要途径和新的趋势。

本发明的竹节参多糖的制备方法把竹节参总多糖分成几个有效部位，利用黏度法区分它们的主要成分；本发明方法制备得到的竹节参多糖具有非常明显的免疫佐剂作用，为开发新型疫苗佐剂指明了方向。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种疫苗佐剂用醇沉竹节参多糖的制备方法。

本发明的另一个目的是提供醇沉竹节参多糖。

本发明的另一个目的是提供所述醇沉竹节参多糖的用途。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种用作疫苗佐剂的醇沉竹节参多糖的制备方法。

该制备方法包括如下步骤：

A、竹节参水提取

将竹节参原料粉碎，按照竹节参与乙醇水溶液的重量比1：5～15，将粉碎竹节参浸泡在体积分数为85～95%乙醇水溶液中，浸泡1～5h，再加热回流提取脱脂，分离得到提取液与竹节参渣，提取液弃去，按照竹节参渣与蒸馏水的重量比1：5～15，往所述竹节参渣中添加蒸馏水，加热回流提取1～5h，然后分离，提余的竹节参渣再用蒸馏水重复提取2～5次，蒸馏水提取液合并，再减压浓缩，除去其水量的4/5～14/15的水分，得到浓缩的水提取液；

B、脱蛋白

按照步骤A得到的浓缩水提取液与Sevage试剂重量比1：0.3～1.5，往所述浓缩水提取液中加入Sevage试剂，震摇后静置，上层液进行离心分离，离心的上清液按照上述操作重复2～10次，得到脱蛋白的上清液；

C、氧化