[发明专利]一种表达低过敏性花生过敏原的乳酸乳球菌重组菌及其应用

权利要求书

1.一种低过敏原性的花生过敏原蛋白mArah2，其特征在于，其是将天然Arah2蛋白的aa47-56抗原表位断开，并按50-151-1-49的氨基酸顺序重新排列得到的低过敏原性花生过敏原基因mArah2，如SEQNo.2所示。

2.一种包含编码根据权利要求1所述的低过敏原性花生过敏原蛋白mArah2的编码基因的重组质粒。

3.包含根据权利要求2所述的重组质粒的乳酸乳球菌菌株。

4.根据权利要求3所述的乳酸乳球菌菌株，其特征在于，所述菌株是用包含低过敏原性的花生过敏原mArah2的编码基因的质粒载体转化乳酸乳球菌NZ9000后所获得的菌株Lactococcus lactis NZMH，于2013年9月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.8219。

5.包含权利要求4所述的重组乳酸乳球菌菌株的疫苗，其特征在于，所述疫苗为口服制剂。

6.根据权利要求5所述的包含重组乳酸乳球菌菌株的疫苗，其特征在于，所述口服制剂为胶囊剂、锭剂、粉剂或颗粒剂。

7.权利要求2所述的重组质粒或权利要求3-4任一项所述的重组乳酸乳球菌菌株在制备可用于治疗花生过敏的乳酸乳球菌疫苗中的用途。

8.一种制备权利要求3所述的重组乳酸乳球菌菌株的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

a)对花生过敏原Arah2的天然基因序列进行密码子优化和修饰突变得到低过敏原性的花生过敏原基因mArah2；

b)构建重组表达质粒；

c)利用重组表达质粒转化乳酸乳球菌并进行筛选鉴定获取重组乳酸乳球菌菌株。

9.根据权利要求8所述的制备重组乳酸乳球菌菌株的方法，其特征在于步骤a）、b）中构建重组表达质粒包括以质粒pUC57-nArah2为模板，分别利用引物P1F:CAGGTGG  TCGTGATCGTTATCGTCAACAATGGGAATTAC/P1R:CCCTCGAGATCTTGTGA  TGGTGAATATG和引物P2F:CGCCATAT GCCATATTCTCCTTCACAAG/P2R:  GTA ATTCCCATTGTTGACGATAACGATCACGACCACCTG扩增aa1-49及aa50-151片段基因；利用1%琼脂糖凝胶电泳检测并分别回收纯化两个基因片段的PCR产物；采用重叠区扩增基因拼接法对目的片段aa1-49、aa50-151进行拼接，以及将拼接完成的目的基因片段mArah2和载体pNZ8148双酶切后进行过夜连接反应的步骤。

10.根据权利要求8所述的制备重组乳酸乳球菌菌株的方法，其特征在于步骤c）中的转化方法是电转化。