[发明专利]LincRNA在制备调控甲氨蝶呤肿瘤治疗耐药性的药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，更具体地，本发明涉及一种lincRNA（large intergenic non-coding RNA,基因间长链非编码RNA）的应用，特别是涉及lincRNA在制备调控甲氨蝶呤（Methotrexate，MTX）肿瘤治疗耐药性的药物中的应用。

背景技术

甲氨蝶呤为抗叶酸类抗肿瘤药，主要通过对二氢叶酸还原酶的抑制而阻碍肿瘤细胞的合成，从而抑制肿瘤细胞的生长与繁殖。作为最早的用于肿瘤治疗的细胞毒性药物，甲氨蝶呤对多种肿瘤包括乳腺癌，骨肉瘤，头颈癌，白血病，结肠癌等都有效果。长期使用后，肿瘤细胞会对甲氨蝶呤产生耐药性，阻碍了其在临床上的应用。

为了更好的治疗肿瘤，降低肿瘤细胞对甲氨蝶呤耐药性的研究广受关注。如公开号为CN103301447A的中国发明专利申请，涉及DNA-PKcs在制备影响DHFR基因扩增改变肿瘤细胞对MTX耐药性的药物中的应用。该发明通过建立MTX耐药细胞进化模型，选取低浓度耐药（HSRs）和高浓度耐药（DMs）细胞为研究对象，检测亲本细胞及耐药细胞中的基因扩增程度和形式、DNA损伤情况及DNA-PKcs的表达情况，进而针对NHEJ途径的核心蛋白DNA-PKcs，在MTX耐药细胞中建立稳定干扰DNA-PKcs的克隆，检测稳定干扰克隆之中DHFR基因的扩增程度和扩增形式、细胞的生长、凋亡和耐药性的变化。

非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA）作为一类新的和重要的生命活动的转录因子，近年来已经得到了广泛的关注。LincRNA是非编码RNA的一种，是一类由蛋白编码基因间的非编码序列转录且转录本长度超过200个核苷酸的功能性RNA分子。至今为止，在哺乳动物基因组中已发现3500多种lincRNAs，它们通过调控基因的表达参与机体的生理过程，而且在实体瘤和白血病中发现很多lincRNAs存在异常表达。虽然他们被发现的时间较短，但是已经有大量的文章报道他们参与包括肿瘤的形成在内的多种生命活动。已经有一些文献报道lincRNAs能调控药物的耐受性，例如，lincRNA Hotair能作为乳腺癌，肝癌及结肠癌的诊断标志并且能调控化疗药物阿霉素的耐受性。

现有技术尚未很好的解决甲氨蝶呤在临床应用中耐药性的问题。而且现有技术中还没有关于lincRNA可以调控甲氨蝶呤肿瘤治疗耐药性的报道，也无关于非编码RNA H19能调控药物的耐受性的报道。

发明内容

有鉴于此，针对上述问题，本发明提供一种新的调控肿瘤对甲氨蝶呤耐药性的非编码RNA。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

LincRNA在制备调控甲氨蝶呤肿瘤治疗耐药性的药物中的应用，所述lincRNA的编码序列如SEQ ID No.1所示。

优选地，所述lincRNA是通过化学合成或者基因克隆制备得到的。

优选地，所述lincRNA来自离体的生物体样本。

更优选地，所述生物体样本为组织或细胞。所述组织为肿瘤病变组织、肿瘤病变组织的石蜡块或石蜡切片。

优选地，所述肿瘤为实体瘤或白血病。

更优选地，所述肿瘤为结肠癌或肝癌。

本发明通过研究发现非编码RNA H19具有调控肿瘤对甲氨蝶呤耐药性的作用。非编码RNA H19是一个2.3kb的非编码RNA分子，由H19基因（其序列如SEQ ID No.1所示）编码，其母系等位基因表达，父系印迹，在哺乳动物中呈现进化上的保守性，是最早被鉴定的印迹基因之一。非编码RNA H19作为一个miRNA海绵或者miRNA竞争子，能与某些miRNAs结合，这些miRNAs能与ABCC2/ABCG2基因3’-UTR结合，从而抑制ABCC2/ABCG2基因表达，进而提高甲氨蝶呤在肿瘤细胞中的耐受性；非编码RNA H19有可能作为甲氨蝶呤在肿瘤治疗中的一个诊断标志或分子靶标，以提高肿瘤治疗的效果。

附图说明

图1为实施例1中HT-29细胞经MTX处理后的细胞形态图。

图2为实施例2中MTX处理对H19在HT-29细胞表达的影响图。**代表P<0.01。

图3为实施例3中H19在HT-29细胞中的表达被siH19沉默图。

图4为实施例3中H19沉默对MTX在HT-29细胞中耐受性的影响图。**代表P<0.01。

图5为实施例4中H19过表达对MTX在HT-29细胞中耐受性的影响图。**代表P<0.01。