[发明专利]一种利用考马斯亮蓝法测定污泥中蛋白质的方法

权利要求书

1.一种利用考马斯亮蓝法测定污泥中蛋白质的方法，其特征在于：

1)试剂的制备：将0.1000g考马斯亮蓝G-250溶于50ml体积百分比浓度为95%乙醇溶液中，加入100ml质量百分比浓度为85%的浓磷酸，然后用蒸馏水补充至200ml，得到Bradford储备液，使用时，按体积比为1:5的比例用蒸馏水稀释Bradford储备液，即200ml储备液加800ml蒸馏水，得到Bradford使用液；配制0.15mol/L的NaCl溶液；

2)标准曲线的测定：称取0.1000g牛血清蛋白溶于玻璃烧杯中，并移至1000mL的容量瓶中，蒸馏水定容，配制100μg/mL的牛血清蛋白标准液；在试管中分别加入0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL牛血清蛋白溶液，不足1ml者，添加0.15mol/L的NaCl溶液使成1ml；然后加入5.0ml Bradford使用液，立即用漩涡振荡器摇匀；显色5-8min后，用分光光度计在λ=595nm测定吸光度值；用测得的吸光度值减去空白的吸光度值，获得校正吸光度值，并以此绘制标准曲线；

3)污泥的预处理：取50ml污泥样品于离心管中；另取一离心管，加自来水与污泥样品配平，在室温下以8000r/min离心机离心15min；倒掉上清液，加入磷酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲溶液Na3PO4浓度为0.05mol/L，NaCl浓度为0.15mol/L且pH值为7，将污泥稀释至原体积；然后将污泥摇散，超声处理3min；

4)蛋白质的提取：将预处理的污泥放在80℃水浴锅内，加热30min，每隔10min将污泥摇匀一次；然后冷却配平；最后在8000r/min离心机内离心15min，取上清液测定，剩余污泥测定MLSS和MLVSS；

5)蛋白质的测定：取一定体积待测溶液于试管中，加入0.15mol/L的NaCl溶液使成1ml；再加入5.0ml Bradford使用液，立即用漩涡振荡器摇匀，另取1ml NaCl溶液同法操作，加入Bradford试剂做空白对照；显色5-8min后，用分光光度计在λ=595nm测定吸光度值；用测得的吸光度值减去空白的吸光度值，得到最终的吸光度值，然后从标准曲线上查得相对应的值，计算出待测蛋白质的含量。