[发明专利]一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法。

背景技术

猪支原体肺炎是猪场一种极为常见的呼吸道疾病，在全世界范围内流行，俗称猪气喘病，由猪肺炎支原体（Mhp）所导致，该病原在猪体内主要寄居在气管、支气管和细支气管的纤毛上，严重破坏猪呼吸道的物理防卫机制-防御粘膜，增加了猪群对其它呼吸性病原体的易感性，如猪流感病毒，猪繁殖和呼吸道综合征病毒，Ⅱ型猪圆环病毒，支气管败血波氏杆菌，胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌等，所以常常造成多种病原的复合感染，引发猪呼吸道综合征（PRDC）或者其他疾病，肺炎支原体可降低猪生长率12.7%和降低饲料报酬13.8%，严重危害养猪业的发展。

猪肺炎支原体为兼性厌氧菌，生长需求极为苛刻，分离相当困难，它对营养要求比一般的支原体高。猪肺炎支原体虽然能够利用培养基中的营养合成自身生长繁殖所需的物质，但由于其基因组的分子量较小，携带的信息量不多，生物合成能力有限，因此需要从体外摄取胆固醇、氨基酸、脂肪酸、核酸前体及维生素等物质，这就促使支原体的培养基成分比较复杂，必须添加一些特殊营养物质。

由于猪肺炎支原体对营养要求比一般支原体高，培养基成分比较复杂，培养时间长，培养物浓度较低，大大地影响了人们对其进一步地研究，同时也阻碍了猪肺炎支原体疫苗开发与生产。目前不少学者设计了多种培养基来供其生长，尽管它们各具特色，但总的说来都没有解决培养困难的问题。所以在猪肺炎支原体的培养上还要做进一步研究。

多糖是中药活性成分之一，大量研究表明，多糖及糖复合物在生物体内不仅是作为能量资源和构成材料，更重要的是它存在于一切细胞膜结构中，参与生命现象中细胞的各种活动。多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的能力。此外，中药多糖对低等生物具有特殊的保护作用。中药多糖富含羟基，可以和低等活性生物活体结合，构建多维网络空间氢键结构，在活性生物活体表面形成保护膜，实现对活性生物的保护作用。

本发明基于上述技术背景，提出一种支原体培养基，具体是一种特别适用于猪肺炎支原体的培养基，提高了猪肺炎支原体菌液浓度。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法的技术方案，通过该培养基培养猪肺炎支原体，可提高猪肺炎支原体菌液浓度，提高猪肺炎支原体抗原产量。

所述的一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：

PPLO            20～50g

酵母粉          2～10g

葡萄糖          3～15g 

1%酚红          0.5～4ml

氨基酸组合      2～10g

复方中药多糖    15～30g

猪血清          50～100ml；

所述的氨基酸组合中含有L-精氨酸、甘氨酸、酪氨酸、L-半胱氨酸和丝氨酸；

所述的复方中药多糖从以下中药组合物中提取得到：黄连、银杏叶、怀牛膝、党参、茯苓、枸杞、甘草和丹参。

所述的一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：

PPLO            30～40g

酵母粉          4～8g

葡萄糖          5～10g 

1%酚红          1～3ml

氨基酸组合      4～8g

复方中药多糖    20～25g

猪血清          60～80ml。

所述的一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于所述的氨基酸组合含有L-精氨酸10～30%、甘氨酸5～15%、酪氨酸10～30%、L-半胱氨酸20～40%和丝氨酸10～30%。

所述的一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于所述的复方中药多糖从以下中药组合物中提取得到：黄连5～15份、银杏叶10～30份、怀牛膝10～20份、党参10～30份、茯苓5～50份、枸杞10～30份、甘草10～20份和丹参5～15份。

所述的一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于所述的复方中药多糖通过以下步骤制得：

a、称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量15倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；