[发明专利]一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：

PPLO            20～50g

酵母粉          2～10g

葡萄糖          3～15g 

1%酚红          0.5～4ml

氨基酸组合      2～10g

复方中药多糖    15～30g

猪血清          50～100ml；

所述的氨基酸组合中含有L-精氨酸、甘氨酸、酪氨酸、L-半胱氨酸和丝氨酸；

所述的复方中药多糖从以下中药组合物中提取得到：黄连、银杏叶、怀牛膝、党参、茯苓、枸杞、甘草和丹参。

2.如权利要求1所述的一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：

PPLO            30～40g

酵母粉          4～8g

葡萄糖          5～10g 

1%酚红          1～3ml

氨基酸组合      4～8g

复方中药多糖    20～25g

猪血清          60～80ml。

3.如权利要求1或2所述的一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于所述的氨基酸组合含有L-精氨酸10～30%、甘氨酸5～15%、酪氨酸10～30%、L-半胱氨酸20～40%和丝氨酸10～30%。

4.如权利要求1或2所述的一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于所述的复方中药多糖从以下中药组合物中提取得到：黄连5～15份、银杏叶10～30份、怀牛膝10～20份、党参10～30份、茯苓5～50份、枸杞10～30份、甘草10～20份和丹参5～15份。

5.如权利要求1所述的一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于所述的复方中药多糖通过以下步骤制得：

a、称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量15倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；

b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

c、将b中上清进行醇沉，沉淀即为粗制中药多糖；

d、用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖，洗涤后用20倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

e、将d中上清经0.22um滤膜过滤除菌后，进行10倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；

f、将e中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥即得到复方中药多糖。

6.一种猪肺炎支原体培养基的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）配制磷酸缓冲溶液；

2）从黄连5～15份、银杏叶10～30份、怀牛膝10～20份、党参10～30份、茯苓5～50份、枸杞10～30份、甘草10～20份和丹参5～15份中提取得到复方中药多糖；

3）称取PPLO 20～50g、酵母粉2～10g、葡萄糖3～15g、氨基酸组合2～10g、复方中药多糖15～30g，溶解于步骤1）制得的1000mL磷酸缓冲溶液中，加入1%酚红0.5～4ml充分混匀，用酸或碱调节pH至7.4～7.8之间，无菌条件下通过0.22μm滤膜，过滤除菌后置4℃保存备用，使用前添加健康猪血清50～100ml，得到猪肺炎支原体培养基。