[发明专利]从三七中制备人参皂苷Rg1的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从三七药材中制备人参皂苷Rg1的新方法，尤其涉及一种从三七药材中提取分离和纯化人参皂苷Rg1的制备方法，属于天然活性产物制备方法技术领域。

背景技术

三七为五加科植物三七panax notoginseng(Burk)F.H.chen的干燥根，是我国名贵中药材，本品具有散瘀止血，消肿定痛。用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌打肿痛。现在主要用于心、脑血管系统疾病的治疗。三七中成分复杂，从他的根、叶、果梗、花蕾、根茎中已经分离近百种成分，主要有皂苷类、挥发油类、氨基酸类、黄酮类、甾醇类、糖类、有机酸类、环二肽类、无机酸类，但其主要有效成分是三七皂苷。

近年的国内外研究表明，单体的生物活性至关重要，因可排除其他成分的存在，易于阐明他的确切药理作用和分析机制，通过多种单体皂苷的构效关系研究易于发现活性较强的化合物，目前三七中单体化合物多集中于Rg1、Rb1、Re、Ra等含量较高成分，现已证明人参皂苷Rg1对于老年性痴呆治疗有效，Re和Rg2抗心律失常较强，抗肿瘤Rh2和Rg3较强。正是由于单体皂苷作用不同，有需要制成单体皂苷制剂。从药材中寻找提取与分离单体的方法尤其重要，一种工艺简便、操作简单的方法是分离单体的目标。

人参皂苷Rg1：分子式：C₄₂H₇₂0₁₄，分子量801.03，

结构式为：

人参皂苷Rg1具有抗衰老、抗氧化、提高免疫力，增强记忆力等功能，对心脑血管、神经系统、免疫系统有广泛的药理作用。人参皂苷Rg1为人参萜三醇结构，首先是从人参中发现，在人参中含量较低，但在三七中含量较高。在植物中分离纯化纯品，一是工艺复杂，二是成分含量少，需要合理及简捷工艺，可使纯化化合物变为可行。有关制备人参皂苷Rg1的方法有多种，有的用乙醇回流提取，上硅胶或氧化铝柱进行分离，有的用超声波回流提取，提取物用酸碱沉淀分离，再用柱层析硅胶或氧化铝柱分离。还有的用D101大孔树脂获得总皂苷，再用硅胶柱分离获得纯品，有的已申请专利，但以上工艺流程长，操作复杂，获得纯品Rg1较困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种工艺简便，操作简捷，产品收率高，经过数十次实验证明工艺稳定，有效地从三七中制备人参皂苷Rg1的新方法。

为了达到上述目的，本发明提供了一种从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，具体步骤为：

第一步：将新鲜三七根洗净、切片、晒干、粉碎成三七粉；

第二步：将第一步得到的三七粉置于圆底烧瓶或回流提取装置中，用有机溶剂加热回流提取至少一次，合并提取液；

第三步：将第二步得到的提取液旋转蒸发回收溶剂，得到三七提取物；

第四步：将第三步得到的三七提取物用有机溶剂溶解，以层析用硅胶拌样，待有机溶剂挥发干净后，干法上硅胶柱，经二氯甲烷和甲醇梯度洗脱，薄层层析色谱检测洗脱进程，收集含有人参皂苷Rg1的洗脱部分，回收溶剂后，得到含有Rg1的粗品；

第五步：将得到的含有Rg1的粗品，用醋酸乙酯溶解，冷却到5℃-10℃时，析出晶体，过滤，得到Rg1纯品。

优选地，所述第二步中的有机溶剂为甲醇，三七粉和有机溶剂的体积比为1：2-3，每次加热回流的时间为1-3小时，加热回流提取的次数为4-5次。

优选地，所述第三步中的旋转蒸发的温度为0-50℃、压力为0.07-0.1Mpa。

优选地，所述第四步中的有机溶剂为甲醇，三七提取物与甲醇的重量体积比为20g：200ml(w／v)，三七提取物与拌样用硅胶的重量比为20g：1200g(w／w)，洗脱用的二氯甲烷和甲醇的体积比为7：1-1：1。

优选地，所述第五步中用高效液相色谱法(HPLC)测定含量，具体条件为：C18250×4.6mm色谱柱，以体积比为19.5：80.5的乙腈和水为流动相，流速1.0ml／min，检测波长为210nm。

优选地，所述第四步中所用的硅胶为200-300目柱层析用硅胶。

优选地，所述第四步中的薄层层析色谱的检测条件为：采用GF254板，展开剂为三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇和水的混合液，所述的三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇和水的体积比为15：40：22：10，以人参皂苷Rg1对照品为对照，直立上行展开，以10％硫酸乙醇溶液喷雾显色或以碘蒸气显色，在105℃加热10分钟，10％硫酸乙醇溶液时显紫色点，碘蒸气显色时，为黄色斑点。