[发明专利]一种检测盐酸克伦特罗化学发光检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体是涉及一种检测盐酸克伦特罗化学发光检测试剂盒。 

背景技术

目前应用于检测食用动物尿液、组织、血清中盐酸克伦特罗的定量检测技术主要有以下几种方法： 

1、气相色谱一质谱联用法(Gc-Ms)

GC—MS可用于动物毛发、尿液及组织中克伦特罗等β—兴奋剂的定性定量分析。在气相—质谱测定克伦特罗的方法中检测牛毛中CL的残留，最低检测限为5ng/g。利用喂食大白鼠克伦特罗获得阳性生物材料，经O．Olmol/L盐酸溶液提取克伦特罗，乙醚脱脂净化，乙酸乙酯提取后蒸发至干，用乙醇溶解后加样到氧化铝柱上。用0．Olmol/L盐酸溶液洗脱。蒸发至干后，用BSTFA(双三甲基硅烷基三氟乙酰胺)+1％(ψ)TMCS(三甲基氯硅烷)衍生，最后采用GC-MS进行测定。克伦特罗回收率为75．5％，检测低限为O.5ug/kg。

GC-MS法优点是能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性，定量分析，而且有较高的灵敏度。缺点是操作复杂，费时，成本高。 

2、高压液相色谱法（HPLC) 

在检测CL时，HPLC分析不需要将CL衍生化，且准确、快速、重复性好、假阳性率低，适用于定量检测。β-肾上腺素能激动剂分子可与18C或8C固定相分子相互作用，所以反相柱常应用于HPLC技术中检测β-激动剂类物质。HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且HPLC可以与柱前提取，纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。HPLC法可采用不同的检测器，有电化学检测器、紫外检测器、光电二极管阵列检测器和质谱检测器。目前，中国己将HPLC法作为检测CL残留的半确证性方法，最低检测限范围为1-15ng/g，但其缺点是检测过程繁琐，检测时间长，需贵重仪器，难于操作，价格昂贵。

3、酶联免疫（ELISA) 

HPLC或GC-MS一般处理步骤费用昂贵．而通常利用竞争酶标免疫法快速检测试纸条（卡）进行检测比较方便经济，其测定基础是竞争性抗原抗体反应。微孔包被有针对兔IgG(CLENbuerol抗体)的羊抗体。克伦特罗(CLENbuterol)抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入CL与CL酶标记物竞争CL抗体，没有连接的CL酶标记物通过洗涤被除去，用相应的酶底物显色。根据样品孔与标准孔的颜色对照判定结果。

ELISA较GC-MS和HPLC有其独特的优越性：样品前期处理比较简单，检测出的数据比较稳定，特异性强，检测速度快；设备成本不高，易于推广，灵敏度高，检测限低于0.5ug/kg。用于EIA的CL抗体有多克隆抗体和单克隆抗体之分，应用多抗存在不同的交叉反应性，应用单抗则大大提高其反应特异性。目前，进口快速检测试纸条（卡）大多应用多抗进行检测。 

4、放射免疫分析技术(RlA) 

放射免疫分析法检测盐酸克伦特罗残留具有很好的特异性和高灵敏度。1976年Ropitar和Zimmer首次报道用放射免疫分析法检测β—肾上腺索激动剂。DelAhaut等人建立了更为特异的放射免疫方法，最低检测限可达到O.5ng/g。国外已生产出运用RIA测定CL的快速检测试纸条（卡），还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析法，这种方法是用受体代替抗体结合CL，检测限可达2．4ng/g。国内在此方面的研究尚属空白。但是RIA法存在着仪器价格昂贵，实验条件要求苛刻，放射性同位素对环境和工作人员都不安全的缺点。

5、荧光免疫分析法(FIA) 

Bacigalupo MA等(1995)利用单克隆技术与荧光免疫分析技术检测了在牛的尿液中克伦特罗的残留，其检测限10ng/ml。相较放射免疫分析法，该法无辐射，只需对样品进行比较简单的处理，同时可以一次检测多个样品，但由于其荧光强度取决于激发波长。且对温度强烈依赖，使其应用受到很大的限制。

6、毛细管区带电泳法(CE)