[发明专利]一种促使质粒发生连接反应的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生化实验室的试验方法，具体来说一种促使质粒发生连接反应的方法。 

背景技术

 质粒（Plasmid）是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子（即细胞附殖粒、又胞附殖粒）。大部分的质粒虽然都是环状构形，然而目前也发现有少数的质粒属于线性构形，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的线粒体等胞器中。天然质粒的DNA长度从数千碱基对至数十万碱基对都有。质粒天然存在于这些生物里面，有时候一个细胞里面可以同时有一种乃至于数种的质粒同时存在。质粒的套数（copy number）在细胞里从单一到数千都有可能。有时有些质粒含有某种抗药基因（如大肠杆菌中就有含有抗四环素基因的质粒）。有一些质粒携带的基因则可以赋予细胞额外的生理代谢能力，乃至于在一些细菌中提高它的致病力。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。它是基因工程最常见的运载体。 

发明内容

为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案： 

一种促使质粒发生连接反应的方法，步骤如下：首先准备好目标DNA，以及ＤＮＡ连接酶，将其胶回收后充分混匀；２１摄氏度条件下反应１２小时；在操作台中，将全部能量转化至大肠感觉的感受态细胞中；所述大肠感觉感受细胞态需要事先经过氯化钙溶液冲洗；冷浴３－５分钟；每隔１０分钟混合、振荡、分离、悬置；上述行为反复十次；用移液枪悬浮细胞，涂抹在琼脂平板上；1个小时后，倒置平板，在37摄氏度的条件下培养15小时，即得。

本发明中,用移液枪悬浮细胞之前需要保留上清液。 

本发明中, 最后可以用灭过菌的竹棒挑取目标质粒。 

本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，转化效率低，而且可以比较完全的对比目的片段。 

具体实施方式

一种促使质粒发生连接反应的方法，步骤如下：首先准备好目标DNA，以及ＤＮＡ连接酶，将其胶回收后充分混匀；２１摄氏度条件下反应１２小时；在操作台中，将全部能量转化至大肠感觉的感受态细胞中；所述大肠感觉感受细胞态需要事先经过氯化钙溶液冲洗；冷浴３分钟；每隔１０分钟混合、振荡、分离、悬置；上述行为反复十次；用移液枪悬浮细胞，涂抹在琼脂平板上；1个小时后，倒置平板，在37摄氏度的条件下培养15小时，即得。用移液枪悬浮细胞之前需要保留上清液。最后用灭过菌的竹棒挑取目标质粒。。 

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。