[发明专利]一种发酵制备埃博霉素B的方法

说明书

本发明公开了一种用活性炭替代大孔树脂发酵合成埃博霉素B的方法，发酵过程中，向发酵培养基中添加活性碳作为目标产物的吸附剂，并且每升培养基中活性碳的添加量为10‑30g。本发明的操作简单，条件温和，原材料来源广泛价格便宜，设备要求低，降低了生产成本，并且提高了发酵产量，特别适合工业化生产。

技术领域

本发明属于埃博霉素B 的生产技术领域，具体涉及一种通过发酵制备获得埃博霉素B的方法。

背景技术

埃博霉素B(Epothilone B) 是粘细菌纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum) 产生的一种聚酮次级代谢产物，是一种大环内酯类的化合物，它与临床上广泛应用的抗肿瘤化疗药物紫杉醇具有相同的稳定微管活性，且对紫杉醇耐药的肿瘤细胞具有活性。另外埃博霉素B来源于微生物代谢产物的特征使其被人们认为是一种比紫杉醇类药物更具市场前途的抗癌药物。埃博霉素B分子式为C₂₇H₄₁NO₆S，相对分子量为507.68，结构式如下：

与临床研究相比，埃博霉素B的生产技术还远远落后。其主要瓶颈在于发酵水平低下，目前粘细菌发酵制备埃博霉素B的产量仅在200mg/L发酵液的水平。这是由于埃博霉素B及其同系物对生产菌株的毒性和反馈抑制作用较大，导致埃博霉素B的发酵水平很难提高。

对于上述问题，现在比较普遍的解决方法是在发酵培养基中加入大孔树脂如XAD-16、AB-8或DA201等吸附产物，从而降低产物对菌株的毒性抑制作用，同时刺激微生物不断代谢产生埃博霉素B。

但这种方法存在以下缺点：树脂在发酵液中分布不均，导致发酵过程取样失去参考价值；树脂是多空渗水物质，有比较大的内表面积，在高压灭菌过程中，内部的空气无法灭菌完全，容易导致发酵因染菌而失败；发酵罐的阀门极易被树脂堵塞；树脂价格昂贵，增加生产成本。

因此找到一种可以替代树脂的材料对埃博霉素B的产业化具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于，针对目前埃博霉素B发酵工艺普遍使用大孔树脂吸附产物的缺点，提供一种发酵水平高，生产成本低的方法，其主要以活性炭替代大孔树脂，具体技术方案如下：

1）在种子罐中培养种子培养液；

所述的种子培养基配制方法：

淀粉10g/L，奶粉5g/L，蛋白胨5g/L，黄豆粉4g/L,硫酸镁1g/L，氯化钙1g/L，碳酸钙3g/L，pH7.5。

配制适量的种子培养基，120℃灭菌30min后冷却至29-31℃，按种子培养基体积比5-10%的接种量接入60-70h种龄的摇瓶种子，培养过程中控制温度为29-31℃，压力为0.04-0.06Mpa，通气为0.5-1.0VVM，转速为100-300rpm，设种子罐初始溶氧为100%，培养过程中保持溶氧在30%以上，持续培养60-70h。

2）在发酵罐中接入种子培养液，并添加活性炭，持续发酵获得埃博霉素B。

所述的发酵培养基配制方法：

发酵培养基A：淀粉40g/L，奶粉10g/L，蛋白胨10g/L，黄豆粉4g/L，硫酸镁1g/L，氯化钙1g/L，碳酸钙3g/L，活性碳10-30g/L，PH7.5。

所述的活性碳为粉末状或颗粒状。

优选地，发酵培养基A中活性碳为20g/L，活性碳为粉末状。