[发明专利]一种胶类中药及其制品中羊源性成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种羊源性成分的检测方法，具体涉及一种胶类中药及其制品中羊源性成分的检测方法，属于中药检测领域。

背景技术

胶类中药由动物的皮、骨等熬制而成胶类物质，包括阿胶、龟甲胶、鹿角胶等，具有典型民族特色的传统中药，广泛用于血液、妇科、产科、呼吸、肿瘤等疾病的预防和治疗。

随着胶类中药市场的不断发展，生产胶类中药的厂家也不断增多，生产能力以及产品质量参差不齐。以阿胶为例，由于驴的畜牧价值在不断下降，而其经济价值确未见提高，驴的数量在世界范围内急剧下降，驴皮的供应也逐年紧张，价格不断上涨。市场上出现了很多不法分子，在生产阿胶时，部分甚至全部用各种其他动物皮包括马皮、牛皮、猪皮等，甚至脏皮、烂皮、病死动物之皮等来取代驴皮进行熬制。这类假冒伪劣产品不但没有任何疗效，还对人体危害极大，影响着人们的身心健康。此外，对于其他胶类中药包括龟甲胶、鹿角胶等及其制品，也存在类似情况，这些伪品严重阻碍了整个胶类中药市场的健康发展。

胶类中药一般经长时间高温蒸煮浓缩而成，主要成分非常相近且不同厂家的生产工艺存在差异，采用红外、近红外、X-衍射等方法对胶类中药纯品进行真伪鉴别常存在判断不准确等情况。有报道称从多肽的角度利用质谱检测胶类中药中龟源性、鹿源性、牛源性、驴源性成分，结果准确可靠。但目前还没有从胶原多肽的角度，也没有从DNA的角度对胶类中药及其制品中羊源性成分的检测方法。

胶类中药中主要成分为胶原蛋白多肽，不同动物的胶原蛋白氨基酸序列存在差异，同一物种稳定存在的差异性多肽可作为该物种的特征性多肽，通过限制性内切酶酶切，利用质谱完全可以对胶类中药及其制品进行溯源鉴定。

发明内容

本发明针对上述问题，提供了一种胶类中药及其制品中羊源性成分的检测方法，该方法操作简单，特征性强，灵敏度高，可用于胶类中药及其制品中羊源性成分的鉴定。

本发明的技术方案如下：

首先，本发明提供了一种胶类中药及其制品中羊源性成分的检测方法，其利用羊亚科动物基因组中具有特异性核苷酸序列或氨基酸序列的不同进行检测，所述特异性氨基酸序列如SEQ.ID No1所示。

优选的，所述胶类中药选自阿胶、黄明胶、龟甲胶或羊角胶；所述羊亚科动物为羊。

优选的，所述胶类中药制品选自由相应胶类中药制成的食品、保健品或药品。

具体地，该方法包括如下步骤：

（1）选取羊亚科动物基因组中特异性氨基酸序列或氨基酸序列,所述特异性氨基酸序列如SEQ.ID No1所示;

（2）将胶类中药或其制品溶解，或提取其中的蛋白多肽类成分溶解，加入限制性内切酶进行酶切；

（3）随后放入液质联用仪，以待检测的阴性样品为基质，加入步骤（1）所得氨基酸序列或羊角胶纯品作为对照，选择该多肽的母离子m/z751.9及其子离子进行监测。

如果检出该离子的保留时间与对照品一致，且其子离子与对照品的子离子一致，则所述胶类中药或其制品含有羊源性成分；如果没有与对照品保留时间一致的该离子，则不含有羊源性成分。

优选的，步骤（2）中所述溶解所用的试剂是质量百分数为1%、pH值8.0的NH₄HCO₃溶液；所述限制性内切酶为胰蛋白酶。

采用本发明的方法，能够快速检测胶类中药中是否含有羊源性成分，从而分辨真伪，尽管胶类中药中胶原蛋白多肽有一定水解与破坏，但本发明基于其主要成分胶原蛋白中的差异性多肽，其含量高，受破坏程度很小，可对胶类中药及其制品中的羊源性成分进行鉴定。

本发明还涉及多肽，其氨基酸序列为Thr-Gly-Glu-Hyp-Gly-Ala-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Phe-Val-Gly-Glu-Lys，及其由所述多肽与相应载体组成的组合物。此外，还包括所述多肽及其组合物在检测胶类中药及其制品中羊源性成分中的应用。

附图说明

图1是合成多肽及纯品胶多反应监测扫描模式下选择离子对m/z751.9→608.4、846.6、903.5监测的质谱图；

图2是合成多肽及加入5%羊皮胶的混合胶多反应监测扫描模式下选择离子对m/z751.9→608.4、846.6、903.5监测的质谱图；

图3是合成多肽及胶类中药制品（以阿胶补血膏为例）在多反应监测扫描模式下选择离子对m/z751.9→608.4、846.6、903.5监测的质谱图。

具体实施方式