[发明专利]三聚氰酸分子印迹固相萃取柱填充材料的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种食品安全技术领域的方法，具体的说，是涉及食品和饲料样品中的三聚氰酸残留的高选择性分离、纯化、富集的三聚氰酸分子印迹固相萃取填充材料的制备方法。

背景技术

三聚氰酸是一种在动物体内的惰性代谢的化学物质，其单独作用于动物和人时不会造成急性毒性，也不会引起发育和生殖毒性，但是相比较而言更容易对雌性动物构成危害。根据前人的研究结论表明，三聚氰酸和三聚氰胺同时存在时，会产生相互之间的协同作用，从而加大了对人体的毒性。它们被人体小肠吸收进入血液循环并最终进入肾脏而形成结石，堵塞肾小管，造成肾衰竭。三聚氰酸的化学分子量相对较小，常规条件下是一种难溶于水的细小颗粒晶体；它也是酰胺类化合物，其本身不具有碱性，与磺酸型的阳离子交换树脂等吸附剂几乎不会相互作用，同时它在很多极性和非极性的吸附剂上的保留也都很低，从而无法有效的纯化样品，造成检测的效率低下，大大的降低了质谱检测的灵敏度和可靠性。

分子印迹固相萃取(Molecularly imprinted solid-phase exaction,MISPE)是利用MIP选择性吸附机理制备SPE填料，不仅可以提高SPE净化效果，实现低浓度残留的富集，提高检测方法的灵敏度，而且可以实现SPE柱的多次重复使用，降低检测成本。

发明内容

本发明的目的在于针对现有的技术的不足，提供一种三聚氰酸分子印迹固相萃取柱填料的制备方法，使其能够简单、快速、高效测定食品和饲料中三聚氰酸残留量的选择性纯化和富集，可直接用于对三聚氰酸的特异选择性分离、高效富集。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种三聚氰酸分子固相萃取柱填充材料的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.分子印迹聚合物的制备：将反应原料模板分子、4-乙烯基吡啶、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯按1：(4～6)：(40～60)的摩尔比加到12～40mL致孔剂乙醇：水(4：1)中，混合均匀后，再按模板分子与引发剂偶氮二异丁腈的摩尔比为1：(0.6～1.2)的比例，加入偶氮二异丁腈，经脱气、充氮后，密封，在40～80℃温度下反应20～48hr，得粗的三聚氰酸分子印迹聚合物；

b.将上述粗的分子印迹聚合物研磨到粒度15～80μm，用乙醇，乙酸和水的混合溶剂进行索氏提取，乙醇和乙酸及水的体积比为(60～80)：(20～10)：(20～10)，提取时间24～72h，用乙腈反复清洗去除乙醇和乙酸，至中性为止。最后再用丙酮反复沉降，以除去细小的颗粒，得到三聚氰酸分子印迹固相萃取柱填充材料。

由于三聚氰酸分子印迹聚合物是一种具有特定空间结构和有效功能基团的交联聚合物，它对三聚氰酸分子的立体结构具有“记忆”功能，用此分子印迹聚合物材料装填于聚丙烯柱体内，制得三聚氰酸分子印迹固相萃取柱，对食品中三聚氰酸具有高选择性的分离、富集和纯化作用。

三聚氰酸分子印迹固相萃取柱层析法较普通溶剂萃取法、普通阳离子聚合物基体填料萃取柱简便、高效。具有专一选择性。可实现三聚氰酸残留的高纯化，低残留检测。

具体实施

现将本发明的具体实施叙述于后。

实施例1

三聚氰酸分子印迹固相萃取柱填充材料的制备，具体原料用用量见表1。

表1反应原料及用量

1.将反应原料模板分子三聚氰酸、功能单体4-乙烯基吡啶、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和致孔剂乙腈和水，按表1的用量依次加到磨口的两口瓶中，超声30min，混合均匀后，再加入偶氮二异丁腈25mg，超声脱气10min，通氮气30min后，密封，在40℃油浴中反应20h，得粗三聚氰酸分子印迹聚合物。放入60℃鼓风干燥烘箱中除去溶剂后得到干燥三聚氰酸分子聚合物。

2.将上述的三聚氰酸分子印迹聚合物研磨到75μm，放入索氏提取器，用混合溶剂V(乙醇)：V(乙酸)：V(水)=60：20：20反复抽提，连续提取时间24h，用乙腈反复清洗去除乙醇和乙酸，至中性为止。最后再用丙酮反复沉降，以除去细小的颗粒。将去除模板分子的聚合物，真空干燥(50℃)，得到三聚氰酸分子印迹固相萃取柱填充材料。

实施例2

三聚氰酸分子印迹固相萃取柱填充材料的制备，具体原料用用量见表2。

表2反应原料及用量