[发明专利]一种紫草酸的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药活性组分的分离纯化方法，尤其涉及一种从丹参中分离纯化紫草酸的方法。

背景技术

丹参是一种临床常用的中药，广泛应用于心脑血管疾病、肝病、肾病、神经系统疾病和肿瘤的预防与治疗。由于中药的传统的使用方法以水煎煮为主，所以丹参中水溶性活性组分吸引了大家的广泛关注。丹参中水溶性活性组分包括丹酚酸B、紫草酸、迷迭香酸、丹参素等(附图1)。

紫草酸是丹参中主要的活性组分之一，文献报道，其具有抗氧化、抗炎、抗HIV活性，可以应用于心脑血管疾病、肝病、肾病、神经系统疾病的治疗和预防作用。另外，紫草酸具有抗HIV病毒整合酶的活性，是一种无毒的HIV病毒抑制剂，可以用于抗AIDS药物的构效关系、结构修饰寻找活性更高化合物等研究。

紫草酸具有极强的水溶性，加上丹参水溶性组分结构相似，性质相近，其纯品的分离纯化及其困难，目前尚没有其纯品的大量制备方法报道。中国专利CN102993143报道了一种采用制备高效液相色谱制备紫草酸单体的方法，可以制备纯度达98％的紫草酸样品。然而，高效液相色谱法只适用于少量样品的制备，且其制备成本高，难以放大至工业生产，无法满足紫草酸做为药物开发的需求。

因此，本领域的技术人员致力于开发一种简单、高效、成本低廉、环境友好的紫草酸制备方法，用来满足紫草酸的新药开发研究，尤其是做为注射制剂原料药的生产工艺。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、高效、成本低廉、环境友好的紫草酸制备方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种制备紫草酸的方法，包括以下步骤：

步骤一、制备丹参提取液

向丹参药材中加入提取剂，经过加热提取后，提取液经过滤浓缩，得丹参提取液，所述提取剂为水、甲醇水溶液或乙醇水溶液；

步骤二、制备紫草酸粗品溶液

将丹参提取液调节至pH10-14，在10-50℃范围内搅拌反应2-10小时，得到紫草酸粗品溶液；

步骤三、大孔吸附树脂分离纯化紫草酸

调节紫草酸粗品溶液至pH6-10，经过大孔吸附树脂柱吸附后，采用水洗脱，分步收集洗脱液，HPLC检测，合并纯度超过98％的紫草酸溶液。

步骤四、浓缩干燥

纯度超过98％的紫草酸溶液经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末。

优选的，步骤一提取溶剂为水时，提取温度为80-100℃。

提取溶剂为乙醇或甲醇溶液时，提取温度为50-70℃。提取液的固液分离，采用过滤、离心或者抽滤的方法。优选提取剂为体积分数40-70％的乙醇水溶液。

优选的，步骤二中pH调节，选用盐酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等常见的非氧化性酸、碱。

优选地，步骤二中还包括将所得的紫草酸粗品溶液调pH为2-4，减压浓缩至粗品溶液原体积的10-10％。更优选的，所得的紫草酸粗品溶液调pH为2-3，减压浓缩温度为40-60℃。将紫草酸粗品溶液减压浓缩，有利于在后续分离纯化步骤中获得较好的分离度，但是申请人发现，直接将紫草酸粗品溶液进行减压浓缩处理，浓缩后的紫草酸粗品溶液中，杂质含量有很大提高且紫草酸含量有所下降，而将pH调为2-4后，再进行减压浓缩，则紫草酸粗品溶液中的杂质含量没有明显的变化，紫草酸的含量也没有明显的变化。

优选的，步骤三中的大孔吸附树脂，选用聚苯乙烯-聚乙烯苯为骨架的树脂，吸附后采用水洗脱树脂。更优选的，所述大孔吸附树脂型号为Hz816、XAD-4或者大孔吸附树脂微球1号。

优选的，步骤三中pH调节至6-8，选用盐酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等常见的非氧化性酸、碱。申请人发现，步骤三中对pH的调节，对与本发明中制备高纯度的紫草酸非常重要，如果浓缩液上柱pH低于6或者高于8，则紫草酸的收率会显著降低。

优选的，步骤三中树脂柱的高径比为3-15：1。

优选的，步骤三中水洗脱体积为柱体积的3-10倍。

步骤四中纯度超过98％的紫草酸样品溶液，经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末。浓缩方法可以是常压、低压真空浓缩、喷雾干燥法、冷冻干燥法中单一的方法或者是这几种方法的混合。

进一步地，本发明步骤二中，采用两步法制备紫草酸粗品溶液，步骤如下：

a)将丹参提取液pH调节至12-14，30-50℃搅拌反应1-2小时；

b)步骤a)中所得溶液pH调节至10-11在10-30℃范围内搅拌反应2-5小时，

得到紫草酸粗品溶液。