[发明专利]喹乙醇代谢物免疫层析试纸卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留的免疫化学快速检测技术领域，具体涉及一种喹乙醇代谢物免疫层析试纸卡及其制备方法。

背景技术

喹乙醇（Olaquindox）又称喹酰胺醇、快育灵，是20世纪70年代初由西德拜尔药厂研制合成的饲料添加剂，因其具有广谱抗菌效果和促生长作用，被广泛用于畜禽养殖、抗菌治疗和水产动物的疫病防控。然而大量生物毒性试验表明：过量的喹乙醇会在动物体内残留，具有明显的蓄积毒性，致癌、致畸变作用和DNA损伤等毒副作用。鉴于对人类健康造成的危害，欧盟委员会EC2788/98决议将喹乙醇列为禁用药，国内NY5070-2002准则中也规定喹乙醇禁用渔药。但喹乙醇本身不稳定，在动物体内能够短时间内代谢成十多种产物，其中3-甲基喹噁啉-2-羧酸（MQCA）是主要代谢物之一，其在体内相对稳定，是国际食品法典委员会认定的残留标识物之一，因此通常将喹乙醇代谢物MQCA作为残留分析和监控的目标物。2003年我国农业部规定了肌肉和肝脏组织中MQCA的最大残留量分别为4 μg/kg和50 μg/kg。

喹乙醇及其代谢物的残留检测方法主要包括薄层色谱法、高效液相色谱法、质谱法、高效液相－质谱联用法等，这些方法灵敏准确、特异性强，分离度好，但需要昂贵的仪器设备，样品前处理复杂、繁琐费时、检测成本高，不能现场操作，而且需要专业技术人员；与之相比，酶联免疫方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选等优点，而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国水产养殖、食品加工企业、药物残留监控部门等开展检测工作。

胶体金免疫层析法是近年来迅速发展的一种新型分析技术，其特点是简便快速、成本低、无污染、无需培训，非常适合于现场检测。与ELISA相比，具有样品前处理简单，显色时间短（3-5 min），且所有试剂包含在一根试纸条上，无需使用仪器等优点，具有广阔的市场前景和应用价值。因此，研制快速、灵敏、高效的喹乙醇代谢物免疫层析试纸卡对于保障动物性食品安全具有十分重要的意义。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种操作简便、快速准确、灵敏度高、特异性强、成本低廉、稳定性好且可进行批量检测的喹乙醇代谢物免疫层析试纸卡及其制备方法。

本发明的技术方案是：

一种喹乙醇代谢物免疫层析试纸卡，其特征在于包括塑料卡壳和封装于塑料卡壳内的试纸条，所述的塑料卡壳是由底座和面盖嵌合在一起构成的，底座上设有放置试纸条的槽和与面盖相嵌合的卡口，面盖上设有观察窗和加样孔以及与底座相嵌合的卡齿，在观察窗旁边分别印有代表检测线的T和代表质控线的C，其中代表检测线的T靠近加样孔的一侧；所述的试纸条的底层为支撑层，该支撑层上由左到右依次附着有交叠连接的样品垫、金标垫、检测垫和吸水垫，其中检测垫的位置与塑料卡壳上观察窗的位置相对应，样品垫的位置与塑料卡壳上加样孔的位置相对应，所述的检测垫以硝酸纤维素膜为基础，包含3-甲基喹噁啉-2-羧酸-鸡卵清白蛋白偶联物溶液喷涂的检测线和羊抗鼠IgG溶液喷涂的质控线，所述金标垫上灌注有胶体金标记的抗喹乙醇代谢物特异性单克隆抗体，所述的样品垫、金标垫和吸水垫上方覆盖有胶膜保护层。

本发明所述的样品垫的制备方法为：将玻璃纤维棉用含有质量浓度为2%的BSA、质量浓度为1%的蔗糖、质量浓度为0.5%的硼酸钠和质量浓度为0.1%的NaN₃的PBS缓冲液处理后，干燥备用，即为样品垫。

本发明所述的金标垫的制备方法为：将玻璃纤维棉裁成4 mm宽的细条，放入含有质量浓度为5%的BSA、质量浓度为2%的蔗糖、质量浓度为0.8%的NaCl和质量浓度为0.05%的NaN₃的PBS缓冲液中20 min，37 ℃恒温烘干，然后将胶体金标记的抗喹乙醇代谢物特异性单克隆抗体灌注已处理好的玻璃纤维棉上，真空冻干4 h，即为金标抗体结合垫。

本发明所述的检测垫的制备方法为：将硝酸纤维素膜置于X-only单向喷点仪平台上，3-甲基喹噁啉-2-羧酸-鸡卵清白蛋白偶联物溶液放于A池，羊抗鼠IgG溶液（GaMIgG）放于B池，展平压紧，开机后将检测抗原和二抗分别点射喷涂于硝酸纤维素膜上，形成检测线和质控线，室温自然干燥后，将其浸入BSA质量浓度为1%的PBS缓冲液，pH值为7.4的封闭液中30 min，37 ℃烘干后，加入干燥剂，4 ℃密封保存。

本发明所述的吸水垫的制备方法为：将以植物长纤维为原材料制作的纯白滤纸用切割机切成4mm宽的细条，并用胶膜进行一侧封闭，干燥备用，即为吸水垫。