[发明专利]一种瘤菌根菌菌株及其应用和菌根真菌接种法

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种瘤菌根菌菌株（Epulorhiza sp.）菌株S1（CGMCC No.8145）及其在促进铁皮石斛生长和多糖积累中的应用和使用其的菌根真菌接种法。

背景技术：

石斛属（Dendrobium）是兰科（Orchidaceae）中的第二大属，全世界石斛属原生种的数量约有1100多种，主要分布在南亚、东亚和东南亚区域（Wang et al.,2011;Chen et al.,2010）。中国有81种，2变种（皱成勇和刘燕，2010）。石斛属多种植物具有较高的药用价值，有生津、止咳、润喉、提高机体免疫力等功效，如铁皮石斛、金钗石斛和鼓槌石斛等（中华人民共和国药典委员会,2010）。

铁皮石斛（Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属中名贵的药用植物，主要分布于云南、广西、安徽等地。由于其对咽喉疾病、提高人体免疫力乃至肿瘤都具有显著疗效，成为了驰名中外的保健佳品。近年来由于市场对铁皮石斛需求日益增加，如何改善铁皮石斛人工栽培技术成为生产者需解决的重要问题。

铁皮石斛（Dendrobium officinale）在海拔达1600m的林下古树和水沟旁陡峭的岩壁上生长（Hou and Guo,2009），具有重要的药用价值，富含多糖，具有提高免疫力和抑制肿瘤细胞生长的功能（Luo et al.,2000;Lin et al.,2011）。近些年来，天然药物产业飞速发展，人们在高额利润的驱动下，常年毫无节制的采挖，野生铁皮石斛数量急剧下降，而且它们的野外生境受到严重破坏，致使其处于濒危境地（Liu et al.,2010）。因此，寻求有效的保护、重建其野外生境和可持续利用的途径刻不容缓。为了保护这些珍贵的野生兰科植物，扩繁技术是其有效途径之一。目前，扩繁主要采用组培技术，但兰科植物组培苗移栽成活率较低，生长比较缓慢（金辉等，2009）。制约人工大量生产和发展的障碍可能是组培苗到大田栽培的中间环节。在野外生境中，兰科植物要与真菌共生形成菌根，才能健壮的生长（Smith et al.,2008）。本发明背景技术所涉及到的参考文献有：金辉，许忠祥，陈金花等，2009.铁皮石斛组培苗与菌根真菌共培养过程中的相互作用.植物生态学报，33（3）：433-441；中华人民共和国药典委员会，2010.中华人民共和国药典.北京：化学工业出版社；皱成勇，刘燕，2010.我国石斛属植物研究进展.安徽农业科学，38（12）：6164-6166；周玉杰，杨福孙，宋希强等，2009.菌根真菌对华石斛幼苗生长及光合性能的影响.北方园艺，12：11-15；Altschul SF,Gish W,Miller W et al.,1990.Basic local alignment search tool.Journal of Molecular Biology,215:403-410；Chen J，Hu KX，Hou XQ et al.，2010.Endophytic fungi assemblages from10Dendrobium medicinal plants(Orchidaceae).World Journal of Microbiology&Biotechnology,27:1009-1016；Doyle JJ,Doyle JL,1987.A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissues.Phytochemical Bulletin,19:11–15；Hou XQ，Guo SX，2009.Interaction between a Dark Septate Endophytic Isolate from Dendrobium sp.and Roots of D.nobile Seedlings.Journal of Integrative Plant Biology,51:374-381；Lin Y,Li J,Li B et al.,2011.Effects of light quality on growth and development of protocorm-like bodies of Dendrobium officinale in vitro.Plant Cell,Tissue and Organ Culture,105:329-335；Liu HX，Luo YB，Liu H，2010.Studies of mycorrhizal fungal of Chinese orchids and their role in orchid conservation in China-A Review.Botany Review，76:241-262；Luo HL,Cai TY,Cheng QL,2000.Enhancement of Dendrobium candidum polysaccharides on killing effect of LAK cells of umbilical cord and peripheral cancer patients in vitro.Chinese Journal of Cancer Research,19:1124-1126；Ma M,Tan TK,Wong SM,2003.Identification and molecular phylogeny of Epulorhiza isolates from tropical orchids.Mycological Research,107:1041-1049；Smith SE,Read DJ,2008.Mycorrhizal symbiosis.Academic Press,New York；Wang H，Fang HY，Wang YQ et al.，2011.In situ seed baiting techniques in Dendrobium officinale Kimuraet Migo and Dendrobium nobile Lindl.：the endangered Chinese endemic Dendrobium (Orchidaceae).World Journal of Microbiology&Biotechnology,27:2051-2059。