[发明专利]一种瘤菌根菌菌株及其应用和菌根真菌接种法

权利要求书

1.一种瘤菌根菌（Epulorhiza sp.）菌株（CGMCC No.8145）。

2.权利要求1所述的瘤菌根菌（Epulorhiza sp.）菌株S1（CGMCC No.8145）在促进铁皮石斛生长中的应用。

3.权利要求1所述的瘤菌根菌（Epulorhiza sp.）菌株S1（CGMCC No.8145）在促进铁皮石斛多糖积累中的应用。

4.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于以铁皮石斛4个月苗龄的组培苗为材料，对其进行人工接种S1（Epulorhiza sp.）菌株，培养60天后，S1真菌与寄主根形成共生关系。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的接种是在无菌条件下，将铁皮石斛4个月苗龄的组培苗转接入100ml/瓶的共生培养基（1/2MS培养基+7.5%蔗糖+7.5%琼脂）的玻璃组培瓶中，每瓶8株苗，7天后，选取无污染的苗，取一PDA平板培养基上活化的S1菌株琼脂块，接入组培瓶中心的培养基上，使染菌的琼脂块离8株苗的距离大致相同，置于温度26±1℃，光照50μmol.m^-2.s^-1，12h/d的组培室内共培养。

6.一种促进铁皮石斛的生长和多糖积累的菌根真菌接种法，其特征在于将权利要求1所述的瘤菌根菌（Epulorhiza sp.）菌株S1（CGMCC No.8145）人工接种到铁皮石斛4个月苗龄的组培苗上，置于温度26±1℃，光照50μmol.m^-2.s^-1，12h/d的组培室内共培养培60天后，S1真菌与寄主根形成共生关系。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于所述的组培苗的获得是将铁皮石斛完整的成熟蒴果冲洗干净，75%乙醇表面消毒15min后，在0.1%升汞溶液中浸泡10min，无菌蒸馏水漂洗3次，用无菌滤纸吸干后，将种子播种于含有改良Harvais培养基的培养瓶中，在温度26±1℃，光照50μmol.m^-2.s^-1，12h/d的组培室内培养，种子萌发成幼苗后，无菌转入另一含改良Harvais培养基的培养瓶中继续培养4个月；无菌条件下，将上述铁皮石斛4个月苗龄的组培苗转接入每瓶100ml含有1/2MS培养基+7.5%蔗糖+7.5%琼脂的共生培养基的组培瓶中，每瓶8株苗，7天后，选取无污染的苗，用打孔器打取PDA平板培养基上活化的S1菌株琼脂块，每瓶接入一个带菌的琼脂小块，置于瓶中心的培养基上，使染菌的琼脂块离8株苗的距离大致相同，置于温度26±1℃，光照50μmol.m^-2.s^-1，12h/d的组培室内共培养，60天后，S1真菌显著地促进了铁皮石斛幼苗的生长和可溶性多糖的积累。

8.如权利要求5或6或7所述的方法，其特征在于所述的培养基的组成为：

PDA培养基：马铃薯20%（煮汁）  葡萄糖2%  琼脂1.5%；

改良Harvais培养基：Ca(NO₃)·4H₂O200mg/L,NH₄NO₃140mg/L,KH₂PO₄100mg/L,MgSO₄·7H₂O100mg/L,KNO₃100mg/L,KCl50mg/L，H₃BO₃0.5mg/L，CuSO₄·5H₂O0.025mg/L，ZnSO₄·7H₂O0.5mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O0.02mg/L,Co(NO₃)₂·6H₂O0.025mg/L,KI0.1mg/L,MnSO₄·H₂O1.54mg/L,(NH₄)₃C₆H₅O₇19mg/L,Fe(NH₄)₃(C₆H₅O₇)₂25mg/L,KT0.25mg,椰乳20ml,蔗糖20g,琼脂9g，活性炭0.3g,土豆30g,PH5.6-5.8；

1/2MS培养基：NH₄NO₃825mg/L,KNO₃950mg/L,CaCl₂·2H₂O220mg/L,MgSO₄·7H₂O185mg/L,KH₂PO₄85mg/L,KI0.83mg/L,H₃BO₃6.20mg/L，MnSO₄·4H₂O22.30mg/L,ZnSO₄·7H₂O8.60mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O0.25mg/L,CuSO₄·5H₂O0.025mg/L,CoCl₂·6H₂O0.025mg/L,FeSO₄·7H₂O27.80mg/L,Na-EDTA·2H₂O37.30mg/L，肌醇100mg/L，烟酸0.5mg/L，盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5mg/L，盐酸硫胺素（维生素B1）0.5mg/L，甘氨酸2.0mg/L。