[发明专利]一种抗昆虫毒素及其编码序列以及重组毒素的制备与应用

权利要求书

1.一种抗昆虫毒素多肽，其特征是：具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的多肽、或者其保守性变异多肽、或其活性衍生物。

2.根据权利要求1所述的抗昆虫毒素多肽，其特征在于：该抗昆虫毒素多肽选自以下组之一：

（a）由SEQ ID NO1所示的氨基酸序列组成的多肽；

（b）将（a）中的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、添加或修饰而形成的具有相同功能的由（a）衍生的多肽。

3.一种多核苷酸，该多核苷酸包含有选自以下组之一的核苷酸序列：

 （a）编码权利要求2的多肽的多核苷酸；

 （b）与多核苷酸（a）互补的多核苷酸。

4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其特征是所述多核苷酸具有如SEQ ID NO2所示的核苷酸序列。

5.一种重组蜈蚣抗昆虫毒素基因rScolotoxin-Ssm2.2，其特征是具有如SEQ ID NO3所示的核苷酸序列。

6.一种重组蜈蚣抗昆虫毒素基因 rScolotoxin-Ssm2.2的表达纯化方法，其特征是包括如下步骤：

A，构建含有重组蜈蚣抗昆虫毒素基因 rScolotoxin-Ssm2.2或含有重组蜈蚣抗昆虫毒素基因rScolotoxin-Ssm2.2突变体基因的重组质粒pSUMO-M-Scolotoxin- Ssm2.2;

B，将重组质粒pSUMO-M-Scolotoxin-Ssm2.2转化至宿主细胞中，得到含有重组质粒的工程菌株；

C，上述工程菌株经IPTG诱导，获得含有重组蜈蚣抗昆虫毒素的菌体；

D，将上述菌体清洗、离心、超声破碎，收集上清液；

D，将上清液反复通过Ni²⁺-IDA亲和层析柱纯化，得到融合蛋白；

E，上述融合蛋白经过SUMO蛋白酶酶切，得到重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin- Ssm2b。

7.根据权利要求6所述的重组蜈蚣抗昆虫毒素基因rScolotoxin-Ssm2.2的表达纯化方法，其特征是选自以下任一或任意几个优选条件:

（1）所述步骤C 的具体步骤为：将重组质粒的工程菌株接种到LB培养液中，当工程菌培养液浓度OD₆₀₀达到0.6~1.0时，加入IPTG至终浓度0.5mol/L，于18℃表达6小时，获得含有重组蜈蚣抗昆虫毒素的菌体；

（2）步骤B中所述的宿主细胞是大肠杆菌BL21(DE3)。

8.根据权利要求6至7中任意一项所述的重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2.2基因的表达纯化方法得到的重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2b。

9.重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2b在制备神经毒性类制剂中的应用；特别是重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2b在制备杀虫剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2b在制备神经毒性类制剂中的应用，其特征是所述重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2b中含有两对正确连接的共价二硫键。