[发明专利]人正常支气管上皮细胞及其原代分离培养和传代培养方法与用途

说明书

 

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种人正常支气管上皮细胞及其原代分离培养和传代培养方法与用途。

背景技术

人体重要器官如肺、肾、肝、胰腺和皮肤都由器官特异性分化的上皮细胞为其组成成分。这些特异性分化的上皮细胞与不同器官的特异性功能直接相关，如肺的气体交换功能、肾的过滤功能、肝的解毒及中和功能、胰腺细胞产生胰岛素、皮肤具有保护机体免受外界环境的伤害。而这些重要器官一旦发生病变或退化就会威胁人类的健康，因为这些重要器官是很难被替换的，不同器官的特异性细胞也不能相互取代其它器官的细胞。这些特异性分化的细胞都是很难再生的，更不要说在体外进行培养增殖了。这样大大限制了人们对机体正常细胞功能的认识，很多来自于科技文献甚至教科书的细胞生物学知识的描述是不准确甚至是错误的。 真正的原因是多数正常细胞的生物学知识来源于体外培养的“癌细胞”研究结果。尽管各国科学家始终不断的尝试着培养和增殖人体重要器官的功能性的上皮细胞， 但是，对于分离自人和哺乳动物的原代上皮细胞的体外培养仍然是很困难的。应用目前的无血清培养基，有的只能进行短期的原代培养（存活数天，如肺和胰腺等上皮细胞），有的只能进行有限的传代培养（1-3代，如气管/支气管及前列腺等上皮细胞），有的甚至根本不能体外培养（如肝、结肠、前列腺等上皮细胞），只有来自于人体皮肤的角化上皮细胞可以传代培养10代左右。而且从每个动物或活体组织样品中获得的上皮细胞产量仍然很低，包括细胞的数量、直接分离或短期培养的细胞纯度都是很低的，这些原代和传代上皮细胞的增殖速度也极为有限。

为了在体外进行上皮细胞的培养，目前国外尝试通过遗传操作，如转入病毒（SV40 T或HPV16E6E7）或细胞癌基因，可以延长体外细胞存活的代数。然而遗传操作的最大缺点是会改变这些细胞的遗传背景和表型，以致让这些正常上皮细胞丢失其正常生理功能，如 p53 和pRB信号通路常常被抑制。而且，这些经遗传修饰的细胞是不可能重新再移植进机体的。但是由于目前缺乏有效的体外培养上皮细胞的技术，上述这些细胞在当今世界的医学和生命科学研究中仍然备受青睐。在非癌症研究领域，它们就代表着最初来源的“功能”性的组织或器官。在癌症研究领域，它们还常常被用来作为“正常细胞”对照，而且它们的市场价格还非常昂贵。现阶段，国内外还从未有过“正常细胞”可以应用于基础和临床医学研究。

    正常人支气管上皮细胞主要功能：（1）支气管表面的上皮细胞构成了基底柱状结构，清除粘液纤毛。（2）由纤毛、无纤毛和能分泌黏液的细胞等混合细胞群组成物理屏障，可有效防止多种有毒物质。（3）产生和分泌大量化学介质和细胞因子形成高度复杂的宿主防御系统。人支气管上皮细胞与主要病理生理疾病有关，如支气管肺癌（多简称为肺癌）、慢性支气管炎、支气管扩张、支气管狭窄。如果能获得体外稳定传代的人正常支气管上皮细胞，将使人们可以更全面地研究细胞的正常功能，疾病发病机理，组织器官功能重建或再造，以及测定药物对正常细胞的毒性，这些都将对基础和临床医学研究与应用有重大意义。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种人正常支气管上皮细胞。该细胞分离培养自中国人的正常肺组织，该细胞未导入任何外源基因，为正常二倍体细胞，基因分型鉴定为国内外从未登记注册过的一种人的正常细胞系。

本发明的另一目的在于提供上述人正常支气管上皮细胞的原代分离培养方法。

本发明的再一目的在于提供上述人正常支气管上皮细胞的传代培养方法。

本发明的目的还在于提供上述人正常支气管上皮细胞的用途。

本发明的目的通过下述技术方案实现：