[发明专利]水体中三苯甲烷类及其代谢物的超高效液相色谱-三重四极杆/复合线性离子阱质谱检测方法

说明书

技术领域

本发明属于环境监测技术领域，具体涉及一种水体中三苯甲烷类及代谢物超高效液相色谱-三重四极杆/复合线性离子阱质谱的检测方法。

背景技术

孔雀石绿（Malachite green，MG）和结晶紫（Crystal violet，CV）均为三苯甲烷类染料，因其具有消毒杀菌作用而广泛用于水产养殖中。另一种三苯甲烷类物质，亮绿（Brilliant green，BG），常用于复染细胞质的三苯甲烷类燃料，文献研究较少，它与MG、CV有类似的化学结构，也容易被水产品吸收。MG和CV在生物体内分别代谢降解产物为隐性孔雀石绿（Leucomalachite green，LMG）和隐性结晶紫（Leucocrystal violet，LCV）。三苯甲烷类及其代谢物具有较高毒性、致癌、致畸、致突变等特性，在生物体内具有较高残留，对人体危害较大，近年成为水体污染和水产品安全的重点监控污染物。美国、加拿大和欧盟等国已将MG、CV列为水产养殖禁用药，许多国家也制定了相关的法律法规及检测措施，欧盟成员国爱尔兰规定养殖排放水中MG含量不得超过100 μg/L，饮用水中不得超过1.0μg/L。我国于2002年5月将MG列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，禁止用于所有食品动物中；农业行业标准使用准则《无公害食品渔用药物使用准则》（NY 5071-2002）中也将MG列为禁用药物；同时严禁在水产养殖中使用MG和CV，并规定MG（含LMG）和（含LCV）不得检出。但由于MG抗菌性效果好，价格低廉，替代品少等原因，仍有部分养殖用户偷偷使用。关于水产品中的三苯甲烷类物质及其代谢物的检测方法已经建立了相应的国标、行标，但目前对水环境中这类杀菌剂并没有相关控制限值，存在环境监管盲点，安全隐患较大。

三苯甲烷类物质分子式如下。

目前，国内外文献报道有关三苯甲烷类物质的测定多采用液相色谱法（紫外检测、荧光检测）或液质联用技术。由于LMG、LCV在紫外可见区无吸收峰，而MG、CV又无荧光响应，故采用高效液相法同时测定这几类物质时往往需要借助一定的前处理手段，如紫外可见法测定时需经过PbO₂柱后衍生，将隐性物质LMG、LCV氧化为显性物质MG、CV，但衍生柱填料配比受到流动相和样品基质的影响，存在转化率不稳定等问题；而使用荧光检测器测定时，可通过在前处理过程中加入还原剂，将MG、CV还原成LMG、LCV；为避免前处理氧化柱或还原剂的繁琐，也有利用高效液相色谱-紫外-荧光串联法，直接测定养殖水中MG、CV及其代谢残留，该方法检出限为0.4 μg/L。目前还未见可以同时检测MG、LMG、CV、LCV、BG五种物质的并且检出限到ng级别的检测方法。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种的水体中三苯甲烷类及其代谢物的超高效液相色谱-三重四极杆/复合线性离子阱质谱检测方法。本发明采用复合质谱是一种先进的新型质谱仪器，串联四极杆线性离子阱技术，极大提高了MS/MS扫描能力，可以建立了一种简单、快速、灵敏的方法，同时测定水体中5种三苯甲烷类及其代谢物，为进一步分析评价生态环境中污染情况提供可靠的检测方法。

本发明是通过下述的技术方案来实现的：

一种水体中三苯甲烷类及其代谢物的超高效液相色谱-三重四极杆/复合线性离子阱质谱检测方法，

该方法所用到的设备包括超高效液相色谱仪和三重四极杆/复合线性离子阱质谱仪，

所述超高效液相色谱仪为ACQUITY UPLC，色谱柱为ACQUITY UPLCTM BEH C18，色谱柱规格为2.1 mm × 50 mm，1.7 μm；柱温为50 ℃；流速为0.5 mL/ min，进样体积5μL；流动相为：以5 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相A，流动相A用甲酸调节至PH=4.5，乙腈为流动相B；洗脱条件为：采用梯度洗脱模式，0 min，20% B，保持0.5 min；2.9 min时，线性增长至80% B，保持1 min；4 min后恢复为20% B，平衡1 min结束；

所述的三重四极杆/复合线性离子阱质谱仪为AB SCIEX QTRAP 5500 质谱仪，所述质谱仪中离子化电压为5000 V，离子源温度为600 ℃，气帘气为40 pis，喷雾气为55 pis，辅助加热气为60 psi，碰撞器为High，离子源为电喷雾离子源，扫描方式为正离子扫描方式，“杆-阱扫描”方式；

该方法包括内标混合液的制备工序、样品溶液的制备工序和上机检测工序，