[发明专利]成纤维样滑膜细胞在制备类风湿关节炎诊断试剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及类风湿关节炎诊断试剂技术，具体地说，是成纤维样滑膜细胞在制备类风湿关节炎诊断试剂中的应用，属于医学领域。

背景技术

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种系统性自身免疫性疾病，主要累及周围关节，表现为慢性、对称性、进行性关节炎。RA的病理改变最初表现为关节滑膜增生，并逐渐向软骨、骨及周围肌腱侵犯，最终导致关节破坏、关节畸形及功能丧失。RA多发于中年女性，患病率在我国为0.32%～0.36%，在欧美国家则高达1%。RA的病因目前尚不清楚，主要与感染因素、遗传因素及激素水平改变有关，其临床表现主要以关节症状为主，表现为晨僵、关节痛、关节肿胀及关节畸形。关节外表现主要包括类风湿结节、类风湿血管炎及肺损坏、肾脏损坏和心脏损坏。RA的诊断主要依据美国风湿病学会1987年RA分类标准：（1）晨僵持续1小时，病程至少6周；（2）有3个或3个以上的关节肿，至少6周；（3）腕、掌指、近端关节肿，至少6周；（4）对称性关节肿，至少6周；（5）有皮下结节；（6）手X线改变；（7）血清类风湿因子（RF）升高；满足4条或4条以上并排除其他关节炎即可诊断为RA。2012年最新的美国风湿病学会RA分类标准中添加了抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）作为RA诊断的检测指标。从上述RA诊断标准看，该疾病的诊断主要依靠临床表现结合放射性检查及实验室检测指标。在已知的RA相关的自身抗体当中，类风湿因子敏感性为60%～70%，特异性为86%；抗角蛋白抗体（AKA）敏感性为44%～73%，特异性为90%；抗核周因子抗体（APF）敏感性为48%～66%，特异性为92%；抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）敏感性为47%～69%，特异性为93%；抗CCP抗体敏感性为47%～82%，特异性为96%。虽然这些RA实验室检测指标已经达到相当高的敏感性和特异性，但据统计，在RA当中仍有20%左右患者呈RF和CCP双阴性，所以，寻求敏感性和特异性更高的RA检测指标及方法，仍是该疾病临床研究的重点课题。

上述的自身抗体检测都是以特定蛋白或多肽为抗原底物，通过抗原抗体反应的原理设计检测血清中针对该蛋白或多肽的抗体。这些抗原底物的来源主要通过分离提纯、重组表达或体外化学合成（多肽）获得，通过上述方法获得的抗原底物与体内天然存在的抗原在理化性质、生物活性或空间构象上存在一定差异，应用这样得到的抗原底物对其血清抗体进行检测会不可避免的造成误差。为避免上述问题，研究者采用间接免疫荧光的方法对疾病进行定性诊断。该方法是将某种特定细胞为底物抗原固定在固相载体上，如载玻片，将待测血清与其反应，再通过带荧光的抗人IgG二抗与血清中能和细胞反应的抗体结合，从而在荧光显微镜下观察荧光强度来判断血清中含抗该细胞抗体多少，与标准阳性血清或阴性血清比较，从而判断待测血清的阴阳性。因为该方法操作简便，判断直观，在临床上得到广泛应用。

抗细胞抗体在临床上应用较多的有如下检测：（1）抗内皮细胞抗体检测是以人脐静脉内皮细胞为底物抗原，用于白色病（BD）的辅助诊断；其在BD中的敏感性为54.8%，特异性为87.2%；而在系统性红斑狼疮（SLE）、系统性硬化症（SSc）及RA中阳性率分别为8%、9%及10%；（2）抗巨核细胞抗体检测是以人巨核细胞为底物抗原，主要用于SLE的辅助诊断；（3）抗人肾脏集合管细胞抗体检测主要用于肾脏疾病的辅助诊断；（4）抗壁细胞抗体检测主要用于恶性贫血的辅助诊断。

蛋白芯片具有高通量、平行检测、自动化等优点，为简便、快速、同时检测多种自身抗体问题的解决带来了希望，在临床疾病诊断等领域中发挥了重要的作用。既往的蛋白芯片在制备过程中所点的样都是特定的抗原（用其来检测特异性抗体），其来源大多数为通过基因工程方法重组表达而成。重组表达的蛋白抗原，无论是原核或真核表达，其蛋白产物在理化性质、生物学活性或免疫学性质上与天然存在的蛋白之间多少存在差异，这样会导致用该蛋白检测人体特异性抗体的时候产生误差。直接用原代培养的细胞作为底物，由于细胞中表达的蛋白与体内细胞比较相差最小，在针对检测该细胞蛋白抗体时比重组表达的蛋白更具优势。现有技术中尚无采用一定数量的成纤维样滑膜细胞点样来检测血清中相应抗体含量从而对RA进行实验室诊断的报道。