[发明专利]成纤维样滑膜细胞在制备类风湿关节炎诊断试剂中的应用

权利要求书

1.成纤维样滑膜细胞在制备类风湿关节炎诊断试剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的成纤维样滑膜细胞是体外培养的人成纤维样滑膜细胞。

3.成纤维样滑膜细胞在制备类风湿关节炎诊断试剂盒中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的诊断试剂盒中包括体外培养的人成纤维样滑膜细胞及间接免疫荧光检测法所用的其他试剂。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的间接免疫荧光检测法的步骤为：

（1）将体外培养的人成纤维样滑膜细胞固定；

（2）用含BSA的PBS封闭液封闭；

（3）取待测血清孵育固定的成纤维样滑膜细胞；

（4）Cy3标记的羊抗人IgG二抗孵育；

（5）DAPI溶液染核；

（6）荧光显微镜观察，类风湿关节炎患者血清孵育的成纤维样滑膜细胞胞浆均匀着色，其他患者及正常人血清孵育的成纤维样滑膜细胞胞浆均不着色。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的荧光显微镜观察条件为：使用铬滤光片，激发波长554nm，发射波长570nm。

7.成纤维样滑膜细胞在制备类风湿关节炎诊断细胞芯片中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的细胞芯片中固定有体外培养的人成纤维样滑膜细胞。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述的细胞芯片的制备方法为：

（1）应用点样仪软件设计矩阵，确定点间距、点样顺序、点样坐标，每个样本设置3个复孔；

（2）选择经预处理的玻片作为基片，将浓度为1×10³/mL的成纤维样滑膜细胞悬液应用点样仪加到基片中，干燥过夜；

（3）将点样后的基片放置到湿盒中，37℃恒温水浴固定2小时；

（4）封闭并洗涤基片，置于4℃保存备用。

10.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述的细胞芯片的使用方法为：取待测血清加入细胞芯片矩阵反应，经过洗涤，然后与Cy3标记的抗人IgG二抗反应，再次洗涤后，用激光共聚焦扫描仪进行扫描荧光强度，最后根据标准曲线用Quant Anlysis分析待测血清中抗成纤维样滑膜细胞抗体浓度，再与cutoff值比较，判断待测血清是否为阳性。