[发明专利]SV40LT重组构建染色体缺失猫叫综合征细胞模型及其细胞库

说明书

技术领域

本发明涉及SV40LT(猴肾病毒40大T抗原基因或SV40LT抗原基因)重组构建染色体缺失猫叫综合征细胞模型及其细胞库，主要用于医学细胞遗传学研究领域，为染色体缺失猫叫综合征的研究提供细胞模型并保存其科研资源。

背景技术

染色体缺失猫叫综合征又称cri-du-chat综合征，是1963年法国科学家首先报告的一种特殊疾病。小儿猫叫综合征是5号染色体短臂缺失所引起的，而且多数缺失是两次断裂的结果，从理论上染色体部分缺失的原因至少有4种：末端缺失、中间缺失、易位和短臂内的不等互换，有人发现缺失部分均有5p14，因此5p14被认为是猫叫综合征的特征区。有病例报道，短臂缺失部分的长度短者为短臂的30％，长者为85％，一般为50％，亦有报告缺失10％也可引起轻型症状。从染色体的变化来看，第5号染色体的短臂上有发音的遗传基因，当此处缺失时，可发生发音音调的变异。

猫叫综合征的临床表现是病儿出生时平均体重低于2500g，身长低于正常儿，平均头围31cm。生长障碍，最显著的特征为婴儿期有微弱的、悲哀的、咪咪似猫叫的哭声，此种哭声在呼气时发生，吸气时不出现。典型哭声常在幼儿早期逐渐消失，但有些年龄较大儿童及成人患者仍有独特的哭声。患儿颅面部发育不良，头小而圆，满月脸。两眼距离过宽及小下颌均很明显，睑裂轻度斜向外下，有内眦赘皮，斜视，白内障。鼻梁宽而平。小耳，稍低位，有时耳道窄。随年龄变化，小头持续存在，但脸变长，下颌骨发育不良更为明显。龋齿，腭弓高。1/3病例可有先天性心血管畸形。肾及各种骨骼畸形(如脊柱侧弯，并指、趾和肋骨畸形等)亦可见。四肢肌张力低，随年龄增长肌张力增高，反射增强。发育明显落后，2岁时才会坐，4岁时才会走，出现一种痉挛性步态。有些病儿似婴儿样卧床不起，不会说话或只能简单说几个字，智能低下，智商多低于20。

据国外报道，猫叫综合征的12％源自双亲之一的染色体平衡易位，因此可对患儿的双亲进行染色体检查，以预测发病风险、减少或者杜绝患儿出生。其他发病原因还有待于进一步的研究。

但是，由于没有可在体外长期培养的、可用于猫叫综合征发病机制研究的永生细胞模型及其细胞库，就难以从细胞水平在体外研究染色体缺失猫叫综合征细胞受物理、化学、生物、遗传等影响的基因突变、基因表达、功能改变、生理特性、生物传导等机制，从而严重限制了染色体缺失猫叫综合征的进一步研究。

国外文献报道，猴肾病毒40(SV40)可以使某些人类细胞发生永生化。Poulin DL、Kung AL和Sullivan CS等研究表明，SV40T抗原基因的导入能加快转化细胞的生长速率，永生化细胞在体外多次传代后，仍具有相对稳定的增殖特性和功能状态，同时也能保留其原始细胞的许多分化表型，可以用于转基因动物模型及人类和动物某些种类的细胞模型的建立，据此可以借助于研究转基因永生化细胞及动物模型而在体外研究原始细胞的特性，从而研究其发病机制。

根据文献报道，Reilly用猿猴病毒(SV40)大T抗原基因转化来建立血管平滑肌细胞株，构建细胞模型以研究肝素对血管平滑肌的抑制作用机制。Su等利用经SV40转化的角化上皮细胞株，构建细胞模型来分析上皮细胞内蛋白质合成的调控作用。Miquel等用SV40转化的角化上皮细胞株，作为细胞模型研究层粘连蛋白5介导的细胞粘附作用。Webber等用经SV40转化的前列腺上皮细胞株作为细胞模型来研究前列腺上皮细胞的生理功能和分泌功能。Racusen等用经Ad12-SV40转化肾小管上皮细胞模型来研究近曲小管的损伤和疾病。Hougton等用SV40转化建立骨髓基质细胞株作为细胞模型以研究在一定培养条件下，细胞具有向脂肪细胞和成骨细胞的双向分化的潜能，进一步研究骨质疏松的机制。

因研究工作的需要，几乎每种疾病都建立了各自的细胞模型。如糖尿病细胞模型、癌细胞细胞模型、转基因细胞模型、绝经期综合症细胞模型、子宫内膜细胞模型、癫痫细胞模型、电子细胞模型、酒精性痴呆细胞模型、脑水肿细胞模型。等等。

但是，至今尚未见有关构建可用于在体外从细胞水平研究染色体缺失猫叫综合征发病机制的永生细胞模型及其细胞库的文献报道，也无法开展相关的研究项目。为了解决上述问题，本发明人提出了本发明。

发明内容