[发明专利]SV40LT介导唐氏综合征细胞模型及其细胞库的构建

说明书

技术领域

本发明涉及猴肾病毒40大T抗原基因(SV40LT)介导唐氏综合征细胞模型及其细胞库的构建方法，主要用于生殖健康研究领域，为唐氏综合征的研究提供细胞模型并保存其科研资源。

背景技术

唐氏综合征亦名21-三体综合征，即患者多了一条21号染色体，表现为先天愚型。我国每年新发唐氏综合征(21三体综合征或先天愚型)1.6万-2万例，将造成经济损失达73亿-90亿，给社会和家庭造成了严重的心理负担和精神痛苦，已严重影响我国的人口质量，已成为社会发展的沉重负担和可持续发展的严重障碍。

近年来，国内外将唐氏综合征列为重大出生缺陷之一，作为重点干预对象，并建立了相应的产前筛查和产前诊断方法。在《国民经济和社会发展的第十一个五年规划纲要》中强调，要加大唐氏综合征等出生缺陷的干预力度，以改善出生人口素质；在《国家中长期科学和技术发展规划纲要(2006-2020年)》中将唐氏综合征等出生缺陷的研究列为优先主题。

目前对唐氏综合征等出生缺陷的研究主要是针对遗传、生物、物理、化学因素与发病(率)的关系以及其早期筛查和诊断方面，如国外有大量的文献报道，21三体等出生缺陷的发生与地区性、受孕时间、有害物接触史等环境因素呈显著相关；Malini SS等报道在18～29岁孕妇的21三体患儿中，91.3％具有外祖母高龄生育的特征；近亲婚配时所存在的两个相同隐性基因与生育唐氏综合征等出生缺陷患儿的关系；Graaf、Rudnicka等报道孕妇的体重、吸烟习惯、孕产次与唐氏综合征筛查指标有关；另有国内学者报道孕妇吸烟、微量元素、心理因素、饮食、TORCH感染等与唐氏综合征等出生缺陷相关。

但是，由于没有可在体外长期培养的、可用于发病机制研究的唐氏综合征永生细胞模型及其细胞库，就难以从细胞水平在体外研究唐氏综合征细胞受物理、化学、生物、遗传等影响的基因突变、基因表达、功能改变、生理特性、生物传导等机制，从而严重限制了唐氏综合征的进一步研究。

国外文献报道，猴肾病毒40(SV40)可以使某些人类细胞发生永生化。Poulin DL、Kung AL和Sullivan CS等研究表明，SV40T抗原基因的导入能加快转化细胞的生长速率，永生化细胞在体外多次传代后，仍具有相对稳定的增殖特性和功能状态，同时也能保留其原始细胞的许多分化表型，可以用于转基因动物模型及人类和动物某些种类的细胞模型的建立，据此可以借助于研究转基因永生化细胞及动物模型而在体外研究原始细胞的特性，从而研究其发病机制。

根据文献报道，Reilly用猿猴病毒(SV40)大T抗原基因转化来建立血管平滑肌细胞株，构建细胞模型以研究肝素对血管平滑肌的抑制作用机制。Su等利用经SV40转化的角化上皮细胞株，构建细胞模型来分析上皮细胞内蛋白质合成的调控作用。Miquel等用SV40转化的角化上皮细胞株，作为细胞模型研究层粘连蛋白5介导的细胞粘附作用。Webber等用经SV40转化的前列腺上皮细胞株作为细胞模型来研究前列腺上皮细胞的生理功能和分泌功能。Racusen等用经Ad12-SV40转化肾小管上皮细胞模型来研究近曲小管的损伤和疾病。Hougton等用SV40转化建立骨髓基质细胞株作为细胞模型以研究在一定培养条件下，细胞具有向脂肪细胞和成骨细胞的双向分化的潜能，进一步研究骨质疏松的机制。

因研究工作的需要，几乎每种疾病都建立了各自的细胞模型。如糖尿病细胞模型、癌细胞细胞模型、转基因细胞模型、绝经期综合征细胞模型、子宫内膜细胞模型、癫痫细胞模型、电子细胞模型、酒精性痴呆细胞模型、脑水肿细胞模型。等等。

但是，至今尚未见有关构建可用于在体外从细胞水平研究唐氏综合征发病机制的永生细胞模型及其细胞库的文献报道，也未开展相关的研究项目。

发明内容

为了解决至今尚未见有关构建可用于在体外从细胞水平研究唐氏综合征发病机制的永生细胞模型及其细胞库的问题，本发明人提出了本发明。

本发明的目的是要提供以SV40LT抗原基因介导唐氏综合征细胞模型及其细胞库的构建方法，另一目的是为在体外从细胞水平研究唐氏综合征的发病机制提供SV40LT抗原基因介导唐氏综合征细胞模型及其细胞库。