[发明专利]一种特立帕肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，涉及一种肽的制备方法，具体涉及一种特立帕肽的制备方法。

背景技术

特立帕肽（Teriparatide）为一种长链的多肽药物，其肽序为：

特立帕肽是美国礼来公司开发的一种合成的多肽激素，其为人甲状旁腺素（PTH）的1-34氨基酸片段，该片段是含有84个氨基酸的内源性PTH的具有生物活性的N-末端区域。

PTH由甲状旁腺分泌，是血钙浓度的一个重要调节因子。血钙浓度下降可刺激PTH的合成与分泌。PTH有3个作用：增加骨钙的释放；减少从肾脏清除的钙量；刺激产生可增加钙吸收的1,25-二羟基维生素D3（1,25(OH)2D3）。虽然PTH的一个主要作用是刺激破骨细胞吸收骨质，但是有研究提供了令人信服的证据：成骨细胞系的骨原细胞是PTH的一个主要作用靶位。PTH间断用药可增加成骨细胞的数量，增加骨的形成。

骨质疏松症作为一种进行性的代谢性骨病变，可导致患者尤其是老年患者发生骨折，从而严重影响患者的生活质量，甚至威胁患者的生命。现有的药物治疗可降低患者发生骨折的风险，减少骨量的丢失，但是不能重建受损的骨的微观结构。因此，尽管使用了现有的治疗药物，但仍有很多患者会发生骨折，或发生骨折的风险仍比较高。人们迫切需要有新的、能够改善骨结构的骨质疏松症治疗药物，其目标是进一步降低骨折风险。

目前的常规骨质疏松药物一般只通过作用于破骨细胞来减缓或阻断骨质流失，而特立帕肽这种甲状旁腺激素的衍生物有增加成骨细胞数目、增强其活性及阻止成骨细胞凋亡的作用。因其可增加成骨细胞的活性及数量，从而可以促进骨生长，用于严重骨质疏松的治疗。

特立帕肽用于原发性及性腺功能减退性骨质疏松症、绝经后骨质疏松症，其为人PTH1-34N端的重组片段，每日皮下注射，会增加成骨细胞的数量和活性，其是对治疗骨质疏松有很大价值的合成制剂，会明显增加临床上相关的骨密度，对于脊椎和所有小梁骨位置的增加优于阿伦磷酸钠。特立帕肽可以明显减少椎体和非椎体的骨折。停药后这种作用会保持几个月，具有高的骨折风险的患者的相对危险度会明显降低。此外这个药物被证明对于男性骨质疏松非常有效。与阿伦磷酸钠相比，用特立帕肽治疗激素性骨质疏松更能明显的提高脊椎和髋部的骨矿物质密度。因此，特立帕肽是第一种具有抗骨折作用的药物。

关于特立帕肽的制备方法，国内外已有报道。专利98811964.1、是涉及特立帕肽组合物的专利，专利98812144.1是涉及特立帕肽结晶的专利。礼来公司通过基因表达得到特立帕肽。此外也有多项涉及通过基因表达得到特立帕肽的专利，如US6590081和201080059570.8。此外，中国专利201210213044.3阐述了特立帕肽的合成方法，其合成肽树脂时采用2-氯树脂的片段合成法分为5个片段进行偶联。

目前一种比较流行的合成特立帕肽的方法是固相逐步合成（SPPS）法，该方法具有操作简单、设备要求低等特点。但是因为特立帕肽由34个氨基酸组成，固相逐步合成法的产品收率低，肽段容易卷曲，反应位点不易暴露，而且产品纯化困难，不易得到高纯度的特立帕肽。专利201210213044.3阐述了特立帕肽的合成方法，其合成肽树脂时采用2-CTC树脂的片段合成法分为5个片段进行偶联。该法采用了大量的2-CTC树脂制备片段肽树脂，并将其裂解下来分别进行偶联。虽然方法新颖，但2-CTC树脂酸敏感性高，偶联时肽容易脱落，从而导致收率不高，且该树脂价格偏高。其特立帕肽纯度在65.8-80.5%之间，总收率在20.5-32.2%之间，总体而言，该方法价格成本高，步骤较繁琐，总体收率不高。此外也有多项涉及通过基因表达得到特立帕肽的专利如US6590081，然而基因表达有着工作量大、三废严重、无法大规模生产等缺点。

发明内容