[发明专利]一种特立帕肽的制备方法

权利要求书

1.一种特立帕肽的制备方法，其包括以下步骤：

1）采用固相合成法，在固相载体上依照特立帕肽的氨基酸序列从碳端开始顺次偶联氨基酸，偶联17位丝氨酸时采用Boc-Ser-OH为原料，并使所述17位丝氨酸的游离羟基与16位天冬酰胺的羧基进行酯缩合，然后再依次偶联其他保护氨基酸；

2）裂解得到粗肽后，将所述17位丝氨酸和16位天冬酰胺之间的酯键转换为酰胺键，得到特立帕肽粗肽溶液。

2.权利要求1的方法，其中所述固相载体为树脂，优选Wang Resin。

3.权利要求1的方法，其中所述酯缩合为DMAP催化的酯缩合。

4.权利要求1的方法，还包括纯化所述特立帕肽粗肽溶液得到特立帕肽，优选地，使用反向高效液相色谱纯化所述特立帕肽粗肽溶液。

5.权利要求1的方法，其中步骤2）包括将所述粗肽在包含NH₄I、二甲硫醚、TFA和水的反应体系I中进行第一步反应，萃取洗涤得到固体后再在磷酸缓冲液中进行第二步反应，其中所述水优选为纯化水。

6.权利要求5的方法，其中所述反应体系I中NH₄I、二甲硫醚与所述粗肽的摩尔比分别为10-30：1和10-30：1，优选分别为15-25：1和15-25：1，更优选分别为20：1和20：1；TFA和水相对于每g粗肽的量分别为20-200ml和20-80ml，优选分别为50-150ml和30-60ml，更优选分别为100ml和50ml；在所述反应体系I中进行所述第一步反应的温度为0℃-15℃，优选0℃-10℃，更优选0℃；进行第一步反应的时间为30-150分钟，优选60-120分钟，更优选90分钟。

7.权利要求5的方法，其中所述磷酸缓冲液的pH为6.5-8.5，优选7-8，更优选7.4；所述磷酸缓冲液的浓度为100mmol/L；进行所述第二步反应的时间为1-3小时，优选2小时。

8.权利要求1-7任一项的方法，其中所述步骤1）包括以下步骤：

a）采用固相合成法，使Fmoc-Phe-OH与固相载体经反应得到Fmoc-Phe-固相载体；

b）使所述Fmoc-Phe-固相载体按顺序依次偶联其他氨基酸，一直到偶联完17位的丝氨酸，得到肽树脂A，其中偶联所述17位丝氨酸采用Boc-Ser-OH为原料；

c）使所述肽树脂A中所述17位丝氨酸的游离羟基与Fmoc-Asn(Trt)-OH进行酯缩合，并脱除Fmoc保护基团，得到肽树脂B；

d）使所述肽树脂B按顺序依次偶联完其他全部保护氨基酸，并脱除Fmoc保护基团，得到肽树脂C。

9.权利要求8的方法，其中，在步骤c）中，进行所述酯缩合的反应体系包括所述肽树脂A、Fmoc-Asn(Trt)-OH、HOBt、DIC和DMAP，优选地，Fmoc-Asn(Trt)-OH、HOBt和DIC与所述肽树脂A的摩尔比均为1-10：1，均更优选3-6：1，均最优选4：1；DMAP与所述肽树脂A的摩尔比为0.1-1.0:1，优选0.3-0.6：1，更优选0.4：1；进行所述酯缩合的反应时间为1-3小时，优选2小时。

10.权利要求8的方法，其中，在步骤c）中，进行所述酯缩合的反应体系包括所述肽树脂A、Fmoc-Asn(Trt)-OH、HOAt、DIC和DMAP，优选地，Fmoc-Asn(Trt)-OH、HOAt和DIC与所述肽树脂A的摩尔比均为1-10：1，均更优选3-6：1，均最优选4：1；DMAP与所述肽树脂A的摩尔比为0.1-1.0：1，优选0.3-0.6：1，更优选0.4：1；进行所述酯缩合的反应时间为1-3小时，优选2小时。