[发明专利]一种抗禽流感病毒的樟芝发酵全液乙醇提取物的制备方法

权利要求书

1.一种抗禽流感病毒的樟芝菌发酵全液乙醇提取物的制备方法，其特征是，所述樟芝菌发酵全液乙醇提取物由下述方法制得：

(1)加热浓缩：取经液体发酵的樟芝菌发酵全液及菌丝体或澄清液放于容器内，在温度50～70℃，压力0.2～0.6Kg/cm²，真空度为0.02～0.06Mpa的条件下进行减压浓缩，使减压浓缩后的发酵全液或澄清液是原体积的1/4～1/2；

(2) 乙醇提取：经浓缩后的樟芝菌发酵全液或澄清液的温度降到30℃以下，往容器中加入80%-95%的乙醇，使浓缩后的樟芝菌发酵全液或澄清液的醇溶液的醇度达到60～70%左右，然后继续加热，温度控制在30～70℃，加热时间是30～120分钟；

(3) 过滤：之后冷却、以180～200目的筛网过滤樟芝菌发酵全液或澄清液，收集滤液，滤渣以其4～8倍体积的80%-95%乙醇稀释，重复上述操作1～2遍，离心收集滤液；

(4)减压浓缩：离心完毕后弃去滤渣，合并收集的滤液，在温度50～70℃，压力0.2～0.6Kg/cm²，真空度为0.02～0.06Mpa的条件下进行减压浓缩，回收乙醇，使滤液浓缩至原有体积的1/5～1/10；

(5) 收集物干燥：将上述浓缩液，在50～60℃温度条件下干燥120～480小时，挥发多余的乙醇和水分； 

(6) 收集物粉碎：取上述烘干的收集物，置35℃条件下进行粉碎，经200目筛网过筛后，即为樟芝菌抗禽流感病毒活性的乙醇提取物；

其中，步骤(1)所述的樟芝菌发酵全液是指樟芝（Antrodia camphorata）发酵液与菌丝体的集合体，

步骤(1)所述的樟芝澄清液是指樟芝（Antrodia camphorata）发酵后澄清液。

2.如权利要求1所述的抗禽流感病毒的樟芝菌发酵全液乙醇提取物的制备方法，其特征在于所述樟芝发酵全液经分离获得樟芝发酵菌丝体和樟芝发酵澄清液。

3.如权利要求1或2所述的抗禽流感病毒的樟芝菌发酵全液乙醇提取物的制备方法，其特征在于，所述樟芝发酵全液通过以下步骤获得：

(1)液体种子培养：采用500毫升三角瓶，每瓶装200毫升液体培养基，将10%的樟芝菌种以常规方法接种到装有液体培养基的三角烧瓶内，调节pH为3-8，培养温度为20-35℃，摇瓶转速为80-280r/min，培养7-15天，即可得到樟芝液体种子；

(2)发酵罐发酵：先将发酵罐中的培养基进行灭菌，灭菌压力为0.1～0.2公斤/平方厘米，灭菌时间为1-2小时；当樟芝液体种子pH值降至2.5-4时，将摇瓶中的樟芝种子接种到50L发酵罐的培养液中，调整pH为5-8，培养温度25-35℃，通气量0.5-1.1vvm，搅拌转速100-250r/min，培养7-30天，即可获得樟芝发酵全液。

4.如权利要求2所述的抗禽流感病毒的樟芝菌发酵全液乙醇提取物的制备方法，其特征在于，所述液体种子培养基或发酵培养基配方以克/100毫升计是：

玉米淀粉       1～3%               蔗  糖          1～5%

蛋白胨       0.2～0.6%             酵母膏        0.2～0.5%

硫酸镁       0.1～0.3%             磷酸二氢钾   0.05～0.1%。

5. 如权利要求1所述的抗禽流感病毒的樟芝菌发酵全液乙醇提取物的制备方法，其特征是，所述樟芝菌株名为樟芝（Antrodia camphorata）Ac001。

6.如权利要求1所述的抗禽流感病毒的樟芝菌发酵全液乙醇提取物的制备方法，其特征在于步骤(4)中所述滤液为乙醇水溶液，浓度为60-95%。

7.如权利要求1所述的抗禽流感病毒的樟芝菌发酵全液乙醇提取物的制备方法，其特征在于步骤(6)中所述收集物干燥使用真空干燥，真空度0.02-0.06Mpa，温度50～60℃，干燥120～480小时。

8. 如权利要求1所述的抗禽流感病毒的樟芝菌发酵全液乙醇提取物的制备方法，其特征在于步骤(7)中所述收集物粉碎时，置35℃条件下进行粉碎，采用200目的中药粉碎机对收集物进行粉碎过筛。