[发明专利]大鲵黏液蛋白、制备方法及在化妆品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种大鲵黏液蛋白及制备方法，尤其是一种具有凝集血红细胞特性的大鲵黏液蛋白、制备方法及在化妆品中的应用。

背景技术

大鲵（Andrias davidianus）是我国特有的珍稀特产，属国家二类保护动物。主要分布于长江中上游、珠江中上游及汉水上游的溪流中。随着养殖规模的发展，大鲵资源的精深加工利用成为一个关系大鲵产业持续发展的紧迫课题。大鲵体表无鳞多皮肤腺，在生长过程中不断分泌黏液，内含多种活性物质。 如Guo等人在《Z. Naturforsh》上发表了从大鲵黏液中提取出的磷脂酶A₂[Z. Naturforsh, 67c, 86-92(2012)]；王立峰等人从大鲵黏液中分离出抗菌肽（《中国生化药物杂志》，2011年，第34卷第4期，269-272页）；冯叙桥等鉴定了从大鲵黏液中制备的糖肽结构（《食品工业科技》，2012年，第33卷第6期，128-131页）。迄今为止，还没有以大鲵黏液为原料，制备具有凝集血红细胞特性的大鲵黏液蛋白的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种具有凝集血红细胞特性的大鲵黏液蛋白、制备方法及在化妆品中的应用。

本发明的技术解决方案是：一种大鲵黏液蛋白，其特征在于分子量为17 000道尔顿，含两个亚基8500道尔顿，所述亚基含有77个氨基酸残基；N末端为：缬氨酸-甘氨酸-酪氨酸-苏氨酸-缬氨酸-甘氨酸-丙氨酸-苏氨酸-脯氨酸-甲硫氨酸-。

所述大鲵黏液蛋白的氨基酸含量（摩尔/100摩尔）为：天冬氨酸和天冬酰胺4.76%， 苏氨酸7.05%，丝氨酸5.62%，谷氨酰胺和谷氨酸5.25%，脯氨酸9.02%，甘氨酸17.88%，丙氨酸4.83%，缬氨酸7.16%, 异亮氨酸7.14%, 亮氨酸 8.25%，酪氨酸5.26%, 苯丙氨酸 5.27% 组氨酸 1.79%， 精氨酸 2.07%，甲硫氨酸1.,32%，赖氨酸7.22%。

一种上述大鲵黏液蛋白的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：

a. 收集大鲵黏液，将大鲵黏液在0~10℃时进行匀浆，向匀浆中加入1~3倍体积pH 7~8含有0.15 M NaCl的0.01~0.1M Tris-HCl缓冲液，置于4℃过夜，5000g离心20 min，收集上清；

b.  向所收集上清中加入(NH₄)₂SO₄至80%饱和浓度，静置过夜后，5000g离心20 min，收集沉淀，透析、冻干，得大鲵黏液冻干粉；

c. 用pH 6-9、0.01-0.1 M Tris-HCl缓冲液溶解大鲵黏液冻干粉，加入到交联的卵黏白蛋白-猪胃黏蛋白（3：1）亲和层析上，先用pH 6-9、0.01-0.1 M Tris-HCl缓冲液清洗，再用1.5 M NaCl溶液洗脱，收集NaCl洗脱液，透析冻干；

d.将冻干粉溶于pH 6-9、0.01-0.1 M Tris-HCl冲液中，再加到分子筛层析

Sephadex G-100 (1.8×98cm) 上，收集具有OD₂₈₀吸收的层析峰，得大鲵黏液蛋白。

一种大鲵黏液蛋白在化妆品中的应用。

所述大鲵黏液蛋白在改善皮肤毛细管血管扩张症化妆品中的应用。

本发明是以大鲵黏液为原料所制备的大鲵黏液蛋白，该大鲵黏液蛋白质具有凝集血红细胞活性、抑制血管内皮生长因子受体I激酶以及促进细胞生长等作用，所制备的化妆品，可降低毛细血管通透性，有效改善皮肤毛细管血管扩张症（俗称红血丝）。

附图说明

图1是本发明实施例的大鲵黏液蛋白SDS聚丙酰胺凝胶电泳图。

图2是本发明实施例的大鲵黏液蛋白凝集血红细胞活性效果图。

图3是本发明实施例的大鲵黏液蛋白抑制血管内皮生长因子受体I激酶的曲线图。

具体实施方式

依次按如下步骤进行：

a. 收集大鲵黏液，将大鲵黏液在0~10℃时进行匀浆，向匀浆中加入1~3倍体积pH 7~8含有0.15 M NaCl的0.01~0.1M Tris-HCl缓冲液，置于4℃过夜，5000g离心20 min，收集上清；

b.  向所收集上清中加入(NH₄)₂SO₄至80%饱和浓度，静置过夜后，5000g离心20 min，收集沉淀，透析、冻干，得大鲵黏液冻干粉；