[发明专利]雷帕霉素诱导调节性γδT细胞的培养方法有效
| 申请号： | 201310384046.3 | 申请日： | 2013-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN103436493A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 黄河;顾嫣珺;胡永仙 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高;赵杭丽 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 霉素 诱导 调节 细胞 培养 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种雷帕霉素诱导调节性γδT细胞的培养方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
（1）人外周血单个核细胞制备：取外周血标本，肝素抗凝，应用人淋巴细胞分离液分离制备单个核细胞，用含10%胎牛血清的完全RPMI1640培养液重悬细胞；
（2）调节性γδT细胞诱导扩增：细胞接种当日按第0天计算，第0天加入唑来膦酸激活γδT细胞，同时加入IL-2/IL-15/TGF-β1和雷帕霉素培养诱导，在第3、6、9天分别进行半量换液，每次换液时均加入新鲜IL-2/IL-15/TGF-β1和雷帕霉素，浓度同前，于第15天检测培养细胞中调节性γδT细胞的含量；
（3）调节性γδT细胞含量的检测：采用流式细胞术，以γδTCR和Foxp3作为分子标记，γδTCR+为γδT细胞的表型特征，γδTCR+Foxp3+为调节性γδT细胞的表型特征，检测调节性γδT细胞在培养细胞中所占的比例；
（4）调节性γδT细胞的富集：采用免疫磁珠分选方法分选γδTCR+细胞群，内包含调节性γδT细胞；
（5）检测富集的调节性γδT细胞的免疫抑制功能：采用流式细胞术，通过CFSE细胞共培养试验检测分析诱导的调节性γδT细胞对新鲜外周血来源单个核细胞的增殖抑制作用。
2.根据权利要求1所述的一种雷帕霉素诱导调节性γδT细胞的培养方法在γδT细胞培养中的应用，所述培养通过雷帕霉素诱导实现。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江大学，未经浙江大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201310384046.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
