[发明专利]高产超氧化物歧化酶的重组菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种高产超氧化物歧化酶的重组菌及其应用。

背景技术

超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）广泛存在于各类生物体中，是机体内超氧阴离子自由基的天然消除剂，对机体细胞起保护作用。因此，SOD在抗衰老以及预防肿瘤和抗炎等方面起着重要的生理作用，受到国内外医药日用化工，食品及生化界的极大关注。SOD在食品工业主要应用四方面：1）作为保健食品的功效因子或食品营养强化剂，添加到各种食品中；2）制成多种剂型的SOD或复合型食品；3）用作食品的天然抗氧化剂；4）以富含SOD的原料加工制成保健食品。此外，SOD添加于化妆品中可起到防晒，防止脂褐素的形成，防治皮肤病以及防治瘢痕形成等作用。

我国自上世纪八十年代以来，对SOD的应用研究主要侧重于动植物SOD的提取和纯化，国内产品大部分是从动物血液中制备的，但由于原材料有限及卫生安全性等原因，导致制品产量有限，且血液制品的安全性风险加大，这种方法慢慢的被淘汰。利用基因工程是广开SOD酶源，降低成本和获得具有天然活性的SOD有效途径。

大肠杆菌K-12(Escherichia coli K-12)品系被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物，国内已有用于食品生产许可的事例（如用大肠杆菌K12生产凝乳酶）。因此选用此系列菌株，能够保证食品安全性。

目前，还没有利用大肠杆菌K-12品系高产超氧化物歧化酶的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种高产超氧化物歧化酶的重组菌及其应用。

本发明所提供的重组菌，是在大肠杆菌（Escherichia coli）菌株BW25113中导入重组质粒pBAD-SOD得到的重组菌；所述重组质粒pBAD-SOD是在原核表达载体pBAD/HisA的多克隆位点（即NheI和PstI酶切位点间）插入超氧化物歧化酶编码基因得到的。

在上述重组菌中，所述超氧化物歧化酶具体可为序列表序列1所示蛋白。

在上述重组菌中，所述超氧化物歧化酶编码基因可为序列表序列2所示基因。

所述重组菌具体可为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BW-pBAD-SOD，已于2013年7月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），保藏号为CGMCC No.7934。

本发明保护上述任一所述重组菌在生产超氧化物歧化酶中的应用。

本发明还提供了一种生产超氧化物歧化酶的方法，包括如下步骤：

将上述任一所述重组菌进行液体发酵，得到所述超氧化物歧化酶；

所述液体发酵按照包括如下步骤的方法进行：

1）将所述重组菌接种至发酵培养基中,获得初始发酵体系；

2）将所述初始发酵体系于30—37℃（如30、33或37℃）条件下搅拌培养至发酵液中菌体OD₆₀₀值为40—45（如40、42或45）；

3）向发酵液中加入L-阿拉伯糖，于28—30℃（如28、29或30℃）条件下搅拌培养；