[发明专利]涉及三萜合成的酶

权利要求书

1.分离的多核苷酸，所述多核苷酸由以下序列组成：

(a)编码甲基转移酶多肽的核苷酸序列，所述多肽由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成；或

(b)由(a)的全长互补序列组成的核苷酸序列。

2.权利要求1的多核苷酸，其中所述编码甲基转移酶的核苷酸序列由SEQ ID NO：3或8中的一种组成。

3.包含权利要求1的多核苷酸的载体。

4.重组DNA构建体，所述构建体包含权利要求1的编码三萜途径的第一种酶的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接至少一种调控序列。

5.权利要求4的重组DNA构建体，所述构建体还包含至少第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码调控三萜途径中至少第二种酶的表达的多肽，其中所述第二种酶是β-香树素合酶或CYP51H10。

6.用于转化细胞的方法，所述方法包括用权利要求4或权利要求5的重组DNA构建体转化细胞。

7.用于生产转基因植物的方法，所述方法包括用权利要求4或权利要求5的重组DNA构建体转化植物细胞并从所述转化过的植物细胞再生转基因植物。

8.包含权利要求4的重组DNA构建体的分离宿主细胞，其中所述宿主细胞不是植物细胞。

9.权利要求8的宿主细胞，其中所述宿主细胞选自酵母细胞和细菌细胞。

10.改变植物细胞中多肽表达水平的方法，所述方法包括：

a)用来自权利要求1的分离多核苷酸的核酸片段转化植物组织，其中所述多核苷酸能够改变天然甲基转移酶的表达；

b)将所述植物组织再生成转基因植物；以及

c)评估当与具有对应的天然甲基转移酶的野生型表达水平的植物比较时，所述转基因植物的甲基转移酶的表达水平改变。

11.生产对至少一种真菌具有抗性的植物的方法，所述方法包括：

a.用至少一种权利要求4的编码三萜途径的第一种酶的重组DNA构建体转化植物细胞；

b.在促进转基因植物再生的条件下使来自步骤(a)的转化过的植物细胞生长；以及

c.评估步骤(b)的转基因植物当与相同物种的未受所述重组DNA构建体转化过的植物比较时，对至少一种真菌的抗性提高；

其中所述植物是单子叶植物。

12.权利要求11的方法，其中所述重组DNA构建体还包含至少第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码调控三萜途径中至少第二种酶的表达的多肽，其中所述第二种酶是β-香树素合酶或CYP51H10。

13.权利要求11的方法，其中所述重组DNA构建体还包含至少一种多核苷酸，所述多核苷酸编码选自β-香树素合酶和CYP51H10的酶。

14.生产具有改变水平的甲基转移酶的植物的方法，所述方法包括：

a)用权利要求4的编码三萜途径的第一种酶的重组DNA构建体转化植物细胞；

b)在促进转基因植物再生的条件下使来自步骤(a)的转化过的植物细胞生长；以及

c)评估当与相同物种的未用所述重组DNA构建体转化过的植物中的甲基转移酶的量比较时，步骤(b)的转基因植物的甲基转移酶的水平改变；

其中所述植物是单子叶植物。

15.权利要求14的方法，其中所述重组DNA构建体还包含至少第二多核苷酸，所述第二多核苷酸编码调控三萜途径中至少第二种酶的表达的多肽。

16.权利要求14的方法，其中所述重组DNA构建体还包含至少一种多核苷酸，所述多核苷酸编码选自β-香树素合酶和CYP51H10的酶。

17.用于生产具有改变的三萜皂苷水平的植物的方法，所述方法包括：

1.用至少一种权利要求4的编码三萜途径的第一种酶的重组DNA构建体转化植物细胞；

2.在促进转基因植物再生的条件下使来自步骤(a)的转化过的植物细胞生长；以及

3.评估步骤(b)的转基因植物当与相同物种的未用所述重组DNA构建体转化过的植物中的三萜皂苷量比较时的三萜皂苷水平改变，

其中所述植物是单子叶植物。