[发明专利]建立梳唇石斛离体持续开花体系的方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种建立梳唇石斛离体持续开花体系的方法。

背景技术：

梳唇石斛（DendrobiumstrongylanthumRchb.f.）又名圆花石斛，是著名中药“石斛”的原植物之一，药材名为吊兰枫斗。舞台艺人用它做饮料，可以滋嗓润喉，久唱音佳。该物种是受保护的兰科植物中极小种群植物，极显珍贵。中国西南野生生物种质资源库植物离体库成功地保存了濒危灭绝的该物种，为其开展深入研究和持续利用提供了平台。

迄今，现有技术中未见有成功建立一种重复性好、持续开花3年以上的梳唇石斛离体实验模式系统的报道。

发明内容：

本发明旨在发明一种建立梳唇石斛离体持续开花体系的方法，该方法重复性好，梳唇石斛已持续开花3年以上。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

建立梳唇石斛离体持续开花体系的方法，取梳唇石斛外植体，进行离体培养，培养温度为25±2℃，光照强度为20μmol/（m²·s），光照12h/d，基本培养基为1/2MS，诱导丛芽产生花序、花序切段培养及营养生长和生殖生长相互转换的培养基为1/2MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+S3%或1/2MS+NAA0.5mg/L+PPP₃₃₃0.2mg/L+S2%或1/2MS+NAA0.5mg/L+Ac0.05%+S2%，所有培养基PH值为5.8，加5.6g/L琼脂固化。

如所述的方法，所述的梳唇石斛外植体为无菌试管丛芽。

如所述的方法，所述的花序切段长2-3cm，培养10瓶，6个切段/瓶。

如所述的方法，所述每组试验供试丛芽瓶数为10瓶，6丛/瓶，3-4芽/丛，重复3次。

如所述的方法，所述的1/2MS为MS培养基大量元素减半，其余成分不变。

如所述的方法，所述的诱导丛芽产生花序、花序切段培养及营养生长和生殖生长相互转换的培养基优选1/2MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+S3%。

与现有技术相比，本发明具备如下的优益性：

通过利用梳唇石斛无菌丛芽，进行离体培养，建立梳唇石斛离体持续开花体系，该方法重复性好。在满足花序切段培养所需的营养和激素的条件下，花序切段可持续开花达3年以上。本发明建立的梳唇石斛离体持续开花模式将为深入研究植物细胞分裂素和生长素在花芽形成、营养生长和生殖生长相互转换中的作用提供材料。

具体实施方式：

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

1、材料与方法：

1.1供试材料：系用2007年采自云南腾冲的野生梳唇石斛材料建立的无菌无性系，并以试管丛芽形式保存在中国西南野生生物种质资源库植物离体库内。具体方法为：梳唇石斛（DendrobiumstrongylanthumRchb.f.）外植体来源于其果实内种子，先将果实在纯乙醇中沾一下，然后在酒精灯上烧后用于接种，通过种子萌发常规培养获得无菌无性系、无菌试管丛芽。

1.2方法：离体库培养室培养温度为25±2℃，光照强度为20μmol/（m²·s），光照12h/d。基本培养基为1/2MS(MS为Murashige&Skoog，1962；1/2MS为MS培养基大量元素减半，其余成分不变)。诱导丛芽产生花序、花序切段培养及营养生长和生殖生长相互转换的培养基为：①1/2MS+BA0.5mg/L（单位下同）+NAA0.2+S3%；或②1/2MS+NAA0.5+PPP₃₃₃0.2+S2%；或③1/2MS+NAA0.5+Ac0.05%+S2%。所有培养基PH值为5.8，加5.6g/L琼脂固化。每组试验供试材料丛芽瓶数为10瓶，6丛/瓶，约4芽/丛，重复3次。丛芽诱导花序数的百分率计算：以每瓶丛芽出现的花序数与接种丛芽总数的比值来计算。花序切段培养：花序切段长2-3cm，培养10瓶，6个切段/瓶。

2.1诱导丛芽离体开花培养基的选择