[发明专利]一种无创产前诊断先天性耳聋遗传病的方法

说明书

技术领域

本发明属于基因诊断技术领域，具体涉及一种以微阵列基因芯片技术为平台技术的无创产前诊断先天性耳聋遗传病的方法。 

背景技术

聋病是影响人类健康和造成人类残疾的常见原因，我国现有2000多万聋哑人，占残疾人总数1/3，并以每年新生儿3万的速度增长。耳聋发生的原因、是否具有遗传性、生育或再次生育是否安全，是耳聋患者及耳聋家庭极为关心的问题。据各国统计，有1/2000(0.05％)一1/1000(0.1％)的儿童出生时为极重度耳聋；同时，一半以上的儿童期耳聋是由于遗传因素造成的。另外在大量的迟发性听力下降患者中，亦有许多患者由自身的基因缺陷致病，或由于基因缺陷和多态性造成对致聋环境因素易感性增加而致病。 

在遗传性耳聋中，有70％为NSHI(nonsyndromie hearingim pairment非综合征型耳聋)，大约75％～85％的NSHI表现为常染色体隐性遗传模式，15％～24％为常染色体显性遗传模式，其余1％～2％为X连锁遗传模式。随着人类基因组计划的完成以及对耳聋疾病致病机制的研究不断深入，遗传性耳聋的病因学研究有了很大进展，目前至少有60余个耳聋基因被克隆，这些发现提示我们遗传性耳聋具有很高的遗传异质性，遗传性耳聋的基因诊断涉及到多个基因的检测，从而加重了遗传性耳聋分子诊断的难度。 

大量的研究表明，GJB2、SLC26A4(PDS)和线粒体基因(mtDNA)的病理性突变导致了大部分的遗传性耳聋，并被证明是中国聋哑人群三种最常见的致聋基因突变。利用基因诊断技术对这三个常见基因检测，可在大约70％的遗传性耳聋患者发现致聋基因突变，这不仅可以耳聋患者明确病因，还使耳聋的遗传咨询与产前诊断成为可能。这不仅使耳聋患者明确病因，还为耳聋的遗传咨询提供了理论依据及科学手段，使先天性耳聋产前诊断结果更客观准确。 

目前，可用于先天性耳聋产前诊断的技术主要有聚合酶链式反应、荧光原位杂交及基因芯片等技术。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)该技术是分子实验室重要的诊断技术之一，在体外扩增DNA片段用于遗传学分析，包括巢式PCR、多重PCR、荧光PCR、荧光定量PCR等。主要用于由于基因缺失而引起的疾病的诊断和多态性分析，即在致病基因附近寻找几个与其紧密连锁的DNA多态性位点，通过连锁分析进行诊断和携带者检测。 但是PCR技术受到扩增效率、等位基因脱扣、污染的可能的影响可能导致误诊，并且PCR仅能检测已知的异常。荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)该技术是利用荧光素标记的探针与DNA片段特异性杂交，探针与特异DNA片段结合形成的杂交分子可以在荧光显微镜荧光激发下显示荧光信号，依据判定信号的有无及类型达到诊断染色体病的目的。此方法无需细胞培养，仅24小时即可得到结果，污染机率小、信号直观、检测时间短，应用较广泛。荧光原位杂交的探针包含以下几种：着丝粒探针(combining centromere probe，CEP)、位点特异性探针(focus-specific probe，LSI)、端粒探针(telomere probe，Tel)、全染色体涂抹探针(whole chromosome probe，WCP)和跨断裂点探针(span break-point probe)。应用不同类型的探针可以筛查先天性耳聋疾病基因携带者进行遗传学诊断。 

PCR及FISH技术即成为大家公认并相继使用的方法。但是这两种方法都存在本身的缺陷，PCR仅可检测已知的异常。荧光原位杂交技术是利用荧光素标记的探针与染色体特异性杂交，依据显微镜观察荧光信号判定结果正常与否，信号直观、检测时间短。但是由于检验的样本来源极为有限，通常仅有1-2个卵裂球细胞。FISH技术仅可检测少量染色体及基因。然而先天性耳聋疾病的发生涉及多条染色体的多个基因，FISH技术并不能满足产前先天性耳聋筛查的需要。