[发明专利]基于纳米金信号放大的人呼吸道合胞病毒检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及基于纳米金信号的人呼吸道合胞病毒检测试剂盒。

背景技术

呼吸道合胞病毒(RSV)属于副粘病毒科肺炎病毒属，为单股负链RNA病毒。该病毒是引起冬春季婴幼儿下呼吸道感染最常见、最主要的病原体之一，约50%的婴儿肺炎和90%的婴儿支气管炎是因感染RSV所致；最新的研究发现免疫功能缺陷的成年人及老年人也是RSV的易感人群。该病毒的传染性强，目前尚无有效的疫苗预防，易引起疾病的暴发流行。因此，开发准确、高灵敏的RSV检测技术及试剂盒不仅对检测与控制RSV流行具有十分重要的意义，而且能为临床早期诊断提供可靠的依据，也是合理选择治疗方案的基础。

检测呼吸道合胞病毒感染，目前国内外多采用病毒分离培养法、免疫荧光法、酶联免疫法、分子生物学法等。病毒分离培养法特异性强，但费时，一般需要1-2周才能观察到病变，且成本较高。分子生物学法最大的特点就是快速、灵敏度高，但是对检测人员实验操作技能要求较严格，也不利于户外操作。而荧光免疫法虽然需时较短，简便，但是采样量大，结果判断有一定主观性。酶联免疫分析(ELISA)已广泛应用于生化分析以及重大疾病诊断。ELISA过程包括抗体吸附在固相载体上称为包被，加待测抗原，再加相应的酶标抗体，生成抗体-抗原-酶标抗体复合物，再与该酶的底物反应生成有色溶液，溶液的吸光度值与抗原的浓度成正比。RSV ELISA检测试剂盒是实验室科学研究的常用试剂，但是现有的试剂盒灵敏度较低。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为人呼吸道合胞病毒的检测提供一种新选择。

本发明的技术方案是基于纳米金信号放大的人呼吸道合胞病毒检测试剂盒，包括RSV参考品，RSV多克隆抗体，金纳米粒子酶标RSV抗体复合物；所述的RSV参考品为RSV病毒抗原，抗原浓度为60～80pg/mL；所述的金纳米粒子酶标RSV抗体复合物以金纳米粒子为载体的辣根过氧化物酶标记的RSV多克隆抗体，抗体浓度为0.83～1.67μg/mL。

优选的，所述的金纳米粒子酶标RSV抗体复合物浓度为0.9μg/mL。

进一步的，所述的试剂盒还包括洗涤液、稀释液、封闭液、显色液、终止液。

其中，所述的洗涤液为含有0.3‰～0.6‰Tween-20(v/v)的磷酸盐缓冲液，pH7.2～7.8。

优选的，所述的洗涤液为含有0.5‰v/vTween-20的磷酸盐缓冲液，pH7.4。

其中，所述的封闭液是含有牛血清蛋白的洗涤液，牛血清蛋白的浓度为0.3～1g/mL。优选的，封闭液中牛血清蛋白的浓度为1g/mL。

其中，所述的稀释液是含有牛血清蛋白的洗涤液，牛血清蛋白的浓度为0.75～1.25mg/mL。优选的，稀释液中牛血清蛋白的浓度为1mg/mL。

其中，所述的显色液是含有四甲基联苯胺和过氧化氢的柠檬酸缓冲液，pH4～5。四甲基联苯胺的浓度为由0.095～0.15mg/mL，过氧化氢的浓度为0.63～0.66mmol/L。

其中，所述的终止液为浓度1～2mol/L的硫酸溶液。优选的，所述的终止液为浓度1mol/L。

其中，所述的RSV病毒抗原采用如下方法制备得到：所述的RSV病毒抗原采用如下方法制备得到：培养Hep-2（人喉癌上皮细胞）或者A549（肺癌细胞）作为RSV宿主细胞，待细胞密度达到80%～90%，加入病毒，35～38℃培养4～6天，细胞出现骤缩、拉网、变小、变圆时，倒出培养液，加入磷酸盐缓冲液，-70～-80℃和室温反复冻融2～3次，2000～3000rpm，4～8℃，离心10～15min，收集上清液，-70～-80℃保存。

优选的，所述的RSV病毒抗原采用如下方法制备得到：培养Hep-2细胞，待细胞密度达到85%，加入病毒，37℃培养6天，细胞出现骤缩、拉网、变小、变圆时，倒出培养液，加入磷酸盐缓冲液，-80℃和室温反复冻融2次，3000rpm，4℃，离心10min，收集上清液，-80℃保存。

其中，所述的金纳米粒子酶标RSV抗体复合物的制备方法包括如下步骤：