[发明专利]基于纳米金信号放大的人呼吸道合胞病毒检测试剂盒

权利要求书

1.基于纳米金信号放大的人呼吸道合胞病毒检测试剂盒，其特征在于：包括RSV参考品，RSV多克隆抗体，金纳米粒子酶标RSV抗体复合物；所述的RSV参考品为RSV病毒抗原，抗原浓度为60～80pg/mL；所述的金纳米粒子酶标RSV抗体复合物为以金纳米粒子作为载体的辣根过氧化物酶标记的RSV多克隆抗体，抗体浓度为0.83～1.67μg/mL。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的抗体浓度为0.9μg/mL。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：还包括洗涤液、稀释液、封闭液、显色液、终止液。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述的洗涤液为含有0.3～0.6v/v‰Tween-20的磷酸盐缓冲液，pH7.2～7.8。

5.如权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于：所述的封闭液是含有牛血清蛋白的洗涤液，牛血清蛋白的浓度为0.3～1g/mL。

6.如权利要求3～5任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述的稀释液是含有牛血清蛋白的洗涤液，牛血清蛋白的浓度为0.75～1.25mg/mL。

7.如权利要求3～6任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述的显色液是含有四甲基联苯胺和过氧化氢的柠檬酸缓冲液，pH4～5，四甲基联苯胺的浓度为0.095～0.15mg/mL，过氧化氢的浓度为0.63～0.66mmol/L。

8.如权利要求3～7任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述的终止液为浓度1mol/L～2mol/L的硫酸溶液。

9.如权利要求1～8任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述的RSV病毒抗原采用如下方法制备得到：培养Hep-2或者A549作为RSV宿主细胞，待细胞密度达到80%～90%，加入病毒，35～37℃培养4～6天，细胞出现骤缩、拉网、变小、变圆时，倒出培养液，加入磷酸盐缓冲液，-70～-80℃和室温反复冻融2～3次，2000～3000rpm，4～8℃，离心10～15min，收集上清液，-70～-80℃保存。

10.如权利要求3～9任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述的金纳米粒子酶标RSV抗体复合物的制备方法包括如下步骤：

a、13～15nm金纳米粒子的合成：超纯水中加入氯金酸，搅拌加热至沸腾，迅速加入柠檬酸三钠溶液，继续搅拌加热回流20～30min，待溶液颜色稳定，形成酒红色停止加热，继续搅拌冷却至室温，0.22～0.45μm滤膜过滤，0～4℃保存备用，所得金纳米粒子粒径为13～15nm；其中超纯水与氯金酸的体积比为97～99︰3.9～4.1，其中氯金酸的质量浓度为1%，超纯水与氯金酸的体积比为97～99︰11～11.6，柠檬酸三钠溶液的质量浓度为1%；

b、金胶酶标抗体偶联：步骤a制备的13nm金纳米粒子溶液与辣根过氧化物酶标记的RSV多克隆抗体（anti-RSV-HRP），混合均匀，室温（24～26℃）孵育15～30min，再向其中加入与前述混合液等体积的封闭液，室温继续孵育15～30min，14000～16000rpm，离心12～20min，去除上清液，稀释液重悬沉淀并洗涤一次，最后用稀释液重悬至浓度为0.83～1.67μg/mL；其中，金纳米粒子溶液与辣根过氧化物酶标记的RSV多克隆抗体的体积比为19～21︰0.8～2。