[发明专利]中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱。

背景技术

吐根为茜草科植物Cephaelis ipecacuanha(Brot.)A.Rich.或Cephaelis acuminate Karsten的干燥根茎，原产于巴西，在其他热带气候地区也有栽培；具有止咳化痰、催吐、抗阿米巴病等功效；有研究表明其主要药理活性成分为生物碱类化学成分。目前吐根药材、吐根粉和吐根糖浆的质量标准在美国药典、日本药典和欧洲药典均有收载。各国药典中多以吐根碱和吐根酚碱的含量做为吐根药材及其制剂的主要质量评价指标，其中在美国药典及欧洲药典中主要是采用示差折光光度法检测吐根碱和吐根酚碱的含量、采用酸碱滴定的方法测定总生物碱的含量；日本药典(JP16)则采用了高效液相色谱法检测吐根碱和吐根酚碱的含量。但是，吐根作为一种中草药，其药效并不是来自任何单一的活性成分，其药效作用应是多种活性成分共同协作的结果。因此，对于吐根及其制剂目前多采用吐根碱和吐根酚碱成分进行质量控制的方法并不能准确全面反映产品的内在质量。

发明内容

为简便、快捷、科学、准确、多指标控制吐根药材及其制剂的质量，本发明提供了中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱，通过获取中药吐根及其制剂的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱，以有效的控制中药吐根及其制剂的质量，保证临床疗效及安全用药。

本发明中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱，所采用的步骤包括如下：

(1)对照品溶液的制备

精密称取盐酸吐根碱对照品，用甲醇制成每1ml含盐酸吐根碱10-30μg的溶液，作为对照品溶液。

(2)供试品溶液的制备

取吐根粉末，置于容量瓶中，加体积比为1∶200的盐酸-60％甲醇水溶液，密塞，静置浸润，超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂置容量瓶中，加甲醇水溶液溶解并定容，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液。

进一步优化为：取吐根粉末0.1-0.5g，置于50-100ml容量瓶中，加体积比为1∶200的盐酸-60％甲醇水溶液，密塞，静置浸润，超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂0.2-1ml，加30-70％甲醇水溶液溶解并定容至50-100ml，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液。

更优化为：取吐根粉末0.25g，置于100ml容量瓶中，加体积比为1∶200的盐酸-60％甲醇水溶液，密塞，静置浸润30分钟后，以功率250w，频率40kHz超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂0.5ml，加60％甲醇水溶液溶解并定容至100ml；摇匀，离心，取上清即得供试品溶液。

(3)色谱条件

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相以乙腈-0.4％的1-庚烷磺酸钠溶液(醋酸调pH至4.0)梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1，柱温为45℃，流速为1.0ml/min，紫外检测波长为205nm，；理论板数按盐酸吐根碱峰计算应不低于3000；

表1：乙腈-0.4％的1-庚烷磺酸钠溶液(醋酸调pH至4.0)梯度洗脱

(4)测定

精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按上述(3)中色谱条件测定，即得指纹图谱。

优选为：精密吸取各供试品溶液5-25μl，注入高效液相色谱仪，按上述(3)中色谱条件测定，即得吐根指纹图谱。

更优选为：精密吸取各供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按上述(3)中色谱条件测定，即得吐根指纹图谱。

(5)标准指纹图谱的制定

采用中药色谱指纹图谱相似性评价系统软件对各吐根药材供试品的指纹图谱进行分析，生成吐根药材标准对照指纹图谱。

(6)相似度计算

取吐根样品，按步骤(2)至(4)同法操作，得到吐根样品指纹图谱，采用中药色谱指纹图谱相似性评价系统软件对所述样品指纹图谱与吐根标准指纹图谱进行比对分析，计算相似度。

中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，所述的其制剂指含吐根的液体、或固体制剂，例如吐根流浸膏、吐根浸膏、吐根酊剂等。

中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，所述的吐根流浸膏每lml相当1g生药材。

所述步骤(2)中离心条件为12000r/min离心10～15min。