[发明专利]中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱

权利要求书

1.中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：精密称取盐酸吐根碱对照品，用甲醇制成每1ml含盐酸吐根碱10-30μg的溶液，作为对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：取吐根粉末，置于容量瓶中，加体积比为1∶200的盐酸-60％甲醇水溶液，密塞，静置浸润，超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂置容量瓶中，加甲醇水溶液溶解并定容，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；

(3)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相以乙腈-0.4％的1-庚烷磺酸钠溶液，梯度洗脱，柱温为45℃，流速为1.0ml/min，紫外检测波长为205nm；

(4)测定：精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按步骤(3)色谱条件测定，即得指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：

步骤(2)供试品溶液的制备：取吐根粉末0.1-0.5g，置于50-100ml容量瓶中，加体积比为1∶200的盐酸-60％甲醇水溶液，密塞，静置浸润，超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂0.2-1ml，加30-70％甲醇水溶液溶解并定容至50-100ml，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；

步骤(4)测定：精密吸取各供试品溶液5-25μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，即得吐根指纹图谱。

3.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：

步骤(2)供试品溶液的制备：取吐根粉末0.25g，置于100ml容量瓶中，加体积比为1∶200的盐酸-60％甲醇水溶液，密塞，静置浸润30分钟后，以功率250w，频率40kHz超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂0.5ml，加60％甲醇水溶液溶解并定容至100ml；摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；

步骤(4)测定：精密吸取各供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，即得吐根指纹图谱。

4.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(3)中所述的梯度洗脱，程序如下：

。

5.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述中药吐根及其制剂的指纹图谱有11个共有峰，其中11号峰盐酸吐根碱为参照峰，各峰相对保留时间和相对峰面积分别为：

相对保留时间：1号峰：0.116～0.124，2号峰：0.135～0.142，3号峰：0.195～0.201，4号峰：0.221～0.229，5号峰：0.285～0.291，6号峰：0.348～0.356，7号峰：0.496～0.504，8号峰：0.790～0.798，9号峰：0.811～0.819，10：0.882～0.891，11号峰：1.000；

相对峰面积：1号峰：0.017～0.078，2号峰：0.008～0.030，3号峰：0.011～0.045，4号峰：0.013～0.020，5号峰：0.710～1.421，6号峰：0.066～0.082，7号峰：0.019～0.071，8号峰：0.008～0.035，9号峰：0.004～0.049，10号峰：0.201～2.522，11号峰：1.000。

6.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：其制剂指吐根流浸膏、吐根浸膏或吐根酊剂。

7.根据权利要求6所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：吐根流浸膏每1ml相当1g生药材。

8.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)中离心条件为12000r/min离心10～15min。

9.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述指纹图谱的建立方法，采用国家药典委员会制定的《中药指纹图谱相似度计算软件》(2004)，经过多点校正，色谱峰的匹配，计算供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱的相似度；指纹图谱相似度计算参数设置为：时间宽度为0.5s；校正方式采用多点校正，校正色谱峰的匹配点为共有峰，5号峰：0.285～0.291，10号峰：0.882～0.891，11号峰：1.000。