[发明专利]鹅原代肝细胞SCD1基因沉默试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种鹅原代肝细胞SCD1基因沉默试剂盒，其特征在于包括下列11种试剂：

序列如SEQ ID NO.1和2所示的SCD1基因的特异干扰双链siRNA，浓度为20μmol/L；转染试剂脂质体2000；无血清Opti-MEM培养液；反转录buffer；反转录酶混合液；Oligo dT引物，浓度为50μmol/L；Random引物，浓度为100μmol/L；去RNA酶双蒸水；序列如SEQ ID NO.3至6所示的荧光定量PCR特异引物，浓度为10μmol/L；高效荧光定量Taq酶混合液；ROX Reference DyeⅡ。

2.权利要求1所述试剂盒在干扰鹅原代肝细胞SCD1的表达及检测中的应用。

3.一种干扰鹅原代肝细胞SCD1表达及检测方法，其操作步骤是：首先将转染特异性的siRNA转染入鹅原代肝细胞，其次在转染48h后，提取细胞总RNA,反转录成cDNA，并进行荧光定量PCR验证；最后分析数据并按公式得出结果。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：培养鹅原代肝细胞，利用试剂（1）─（3）将SCD1特异性干扰双链siRNA转染入鹅原代肝细胞，实验设置干扰组，空白对照组，阴性对照组，转染试剂对照组，6h后换液，48h后采用TRIZOL法提取细胞总RNA，利用（4）─（8）将总RNA反转录成cDNA,然后以cDNA为模板，利用（8）─（11）进行荧光定量PCR，验证干扰效果。