[发明专利]一种生产瑞替普酶的发酵培养基及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于生产瑞替普酶的发酵培养基及其制备方法，属于微生物发酵工程领域。

背景技术

现今心脑血管疾病已是人类健康的最大威胁之一，患病人数逐年上升，而且发病年龄也越发年轻化，田文静等在“乳糖诱导瑞替普酶在大肠杆菌中的可溶性表达”（中国生化药物杂志, 2011, 32(5)）一文中指出全世界每年心血管疾病患者多达1300万。在中国，每年需要进行脑梗塞、心肌梗塞等血栓类疾病治疗的人数就上百万，因此研制和生产高效的溶栓药就显得十分必要。赵友春等在“第三代溶血栓药物研究进展”（药学进展, 2004, 28(2): 72-75）中介绍到，目前溶栓药物已发展到第三代，具有快速溶栓，治愈率高，半衰期长，副作用小等优点，在临床上具有较强的竞争性，但价格也比较昂贵，所以，生产出低成本的溶血栓药物具有显著的经济效益和重大的社会意义。另外，赵友春等在“提高溶栓新药瑞替普酶生产得率的中试研究”（化工科技, 2003, 11(1): 15-17）一文中报道，目前多数是对瑞替普酶菌株的构建和复性纯化研究，而鲜有报道实际生产中是如何进行菌株工业化发酵生产。现有技术中，瑞替普酶的工业生产中主要采用大肠杆菌进行培养，采用更有效的培养技术来提高菌体的发酵密度，能够提供产物的产率，而选择合适的发酵培养基，不仅可以减少培养体积，强化下游分离提取，还可以缩短生产周期，减少设备投资，从而降低生产成本，极大地提高产品的市场竞争力。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种用于生产瑞替普酶的培养基。

本发明的另一目的是提供上述用于生产瑞替普酶的培养基的制备方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：

一种用于生产瑞替普酶的发酵培养基，主要由KH₂PO₄、K₂HPO₄ ·2H₂O、(NH4)₂SO₄、FeSO₄·7H₂O、CaCl₂·2H₂O、CoCl₂·6H₂O、CuSO₄·5H₂O、MnSO₄·H₂O、Na₂MoO₄·2H₂O、20%酪蛋白、MgSO₄、卡那霉素、葡萄糖、柠檬酸、消泡剂、酵母提取物和H₂O组成，其中培养基的主要组成为：

A液：每升H₂O中含KH₂PO₄  25-40g、K₂HPO₄ ·2H₂O 57.5-80g、(NH4)₂SO₄ 17.5-25.8g、FeSO₄·7H₂O  0.008-0.015g；

B液：每升H₂O中含CaCl₂·2H₂O 0.8-1.6g、CoCl₂·6H₂O  1.60-2.93g、CuSO₄·5H₂O 1.5-2.5g、FeSO₄·7H₂O  1.80-2.87g、MnSO₄·H₂O 1.0-1.93g、Na₂MoO₄·2H₂O 1.60-2.67g；

C液：每升H₂O中含20%酪蛋白25.0-42.0ml、1M MgSO₄ 16.0-37.0ml、50mg/ml卡那霉素10.0-23.5ml、70%葡萄糖772.5-867.5ml、40%(NH₄)₂SO₄ 80-120ml、5%柠檬酸1.5-5.0ml。

优选地，上述用于生产瑞替普酶的发酵培养基，其中培养基的主要组成为：