[发明专利]黄曲霉毒素M1金标快速检测卡及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，涉及原料奶中黄曲霉毒素M1快速检测产品和方法。

背景技术

黄曲霉毒素(Aflatoxin，AF）属于黄曲霉毒素类的一种，均为二氢呋喃香豆素的衍生物，是食品中广泛存在的一种高致癌性真菌毒素，是黄曲霉(Asperillusflavus)和寄生曲霉(Asperillus parasiticus)的二次代谢产物。黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1，AFM₁)是动物摄入黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB₁)后在体内经羟基化而形成的产物，其危害主要表现在致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，可导致肝癌甚至死亡，主要存在于动物的可食部分，如乳、肝、蛋类等，其中以乳最为常见。

在动物实验中，成功诱发肝癌的动物有大鼠、小鼠、豚鼠、雪豹、鸭狗、猫、兔、猴等，所以AFM₁被国际食品准则委员会列为ⅡB人类致癌物，现在已归为一类致癌物。我国于1998年规定牛乳中AFM₁的限量标准为0.5μg/Kg，与美国、日本的限量标准类似，但是远比欧盟的限量标准宽松。2004年国家质检总局发布消息称，欧盟公布了新的黄曲霉毒素限量标准，其中规定在包括谷类食品在内的婴幼儿食品以及具有特殊医疗目的的婴儿食品中，AFM₁的最大限量分别为0.1和0.025μg/kg，该规定在2005年11月1日起在所有的成员国实施。鉴于国外对AFM₁限量标准的进一步提高的趋势，我国急需制定新的相关标准，同时需要开发与新标准相适应的新的AFM₁快速检测方法。

国内外检测AF的方法有微柱法、薄层色谱法（TLC）、液相色谱法（LC）、ELISA等。

Romer微柱法于1975年首次通过，1988年最后通过作为AOAC的法定方法。该法适用于检测食品及饲料中的总AF。Holaday-Velasco微柱法于1979年首次通过，1988年最后通过AOAC法定方法。该法适用于检测白玉米﹑黄玉米﹑生的去壳花生中≥10μg/kg的总AF。TLC是检测AF常用的方法。AOAC的TLC法有检测花生和花生制品中AF的CB法和BF法，这两种方法均作为法定方法于1988年首次通过。还有检测椰子、干椰子和椰子粉、玉米、鲜咖啡、开心果、大豆、鸡蛋、奶及奶制品、肝等食品中测定AF/AFB₁/AFM₁的TLC法也作为法定方法于1988年最后通过。20世纪90年代AOAC开始将免疫学用于检测AF的法定方法。

我国于20世纪70年代初建立检测各种食品中AF的方法。测定AFB₁的TLC法已通过作为国标方法(GB/T5009.22-1996)，该方法适用于粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中AFB₁的测定；AFB₁与AFM₁的TLC法。GB/T5009.24-1996)适用于测定牛乳及其制品﹑黄油及新鲜猪组织(肝、肾、血及瘦肉)等食品中的AFB1和AFM₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂的TLC法，适用于各种食品中的总AF的测定。AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂的微柱筛选法。(GB/T500009.23-1996)可用于测定各种食品中总AF。除上述方法外，还建立了测定各种食品中AF的ELISA以及HPLC法等，这些检测方法的建立为食品中AF的污染监测提供了技术支撑。

但这些检测方法对操作人员的专业技术要求高、前处理方法复杂、检测时间长、需昂贵仪器的辅助以及单个样品检测成本高等特点不能广泛的应用于大量样品的快速筛查。胶体金免疫层析技术很好的规避了上述问题，具有检测速度快、检测成本低、对操作人员专业要求不高等特点，可应用于实验室和现场的残留检测。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种能够对原奶样品中黄曲霉毒素M1残留进行快速筛选检测的试剂盒及其检测方法和应用；发明主要目的在于实现大量样品的快速筛选检测，解决传统检测方法耗时长、成本高、操作人员专业要求高、需仪器设备辅助，不能实现大量样品的快速筛查等特点，同时通过样品前处理实现不同检测灵敏度的检测，满足不同客户的检测需求，从而提供一种更加快速、简捷、性价比高、安全的检测试剂盒及检测方法。