[发明专利]一套干酪乳杆菌食品级表面展示系统及其在异源蛋白表达中的应用

权利要求书

1.一套干酪乳杆菌食品级表面展示系统，其特征在于包括食品级宿主干酪乳杆菌Q-5 CGMCC7936和食品级表面展示载体pQJ5。

2.   如权利要求1所述的一套干酪乳杆菌食品级表面展示系统，其特征在于所述食品级宿主干酪乳杆菌Q-5 CGMCC7936是对干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）ATCC 334进行质粒消除并筛选而获得，丧失了代谢乳糖的能力。

3.如权利要求2所述的一套干酪乳杆菌食品级表面展示系统，其特征在于所述质粒消除是亚致死高温诱导的质粒消除或新霉素诱导的质粒消除。

4.如权利要求1所述的一套干酪乳杆菌食品级表面展示系统，其特征在于所述食品级表面展示载体pQJ5，其碱基序列如序列表所示。

5.如权利要求1所述的一套干酪乳杆菌食品级表面展示系统，其特征在于所述食品级表面展示载体pQJ5是通过如下方案获得：

在乳酸菌表达载体pNZ2102的基础上保留来源于乳酸链球菌的pSH71复制子和PlacA启动子，敲除编码氯霉素抗性基因的碱基序列，插入来源于干酪乳杆菌ATCC 334的乳糖代谢基因lacE、lacG和lacF，插入来自于嗜酸乳杆菌CICC 6075的S-层蛋白基因slpA及其启动子和信号肽。

6.如权利要求5所述的一套干酪乳杆菌食品级表面展示系统，其特征在于所述干酪乳杆菌ATCC 334的乳糖代谢基因lacE、lacG和lacF是食品级表面展示载体pQJ5与食品级宿主干酪乳杆菌Q-5 CGMCC7936完成互补筛选的食品级标记。

7.如权利要求5所述的一套干酪乳杆菌食品级表面展示系统，其特征在于所述嗜酸乳杆菌CICC 6075的S-层蛋白基因slpA及其启动子和信号肽序列是用于实现异源蛋白在细胞表面表达的DNA元件。

8.本发明同时提供了利用上述干酪乳杆菌食品级表面展示系统实现其异源蛋白表达的方法，其特征在于通过如下方案实现：

采用重组PCR方法构建报告基因绿色荧光蛋白基因gfp和S-层蛋白基因slpA的融合基因slpA-gfp，并用该融合基因取代载体pQJ5上的slpA，采用电转化法将构建好的载体pQJ5质粒转入干酪乳杆菌Q-5 CGMCC7936中，运用激光共聚焦显微镜法检测绿色荧光蛋白在干酪乳杆菌细胞表面的表达。