[发明专利]核苷酸mts90及其在结核病诊断中的用途

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及核苷酸mts90及其在结核病诊断中的用途。

背景技术

结核病是一种严重危害人类健康的慢性传染病，目前全球有约20亿人被感染，每年新出现结核病患者约800万～1000万，每年因结核病死亡人数约为200万～300万。根据世界卫生组织的统计，我国是全球22个结核病流行严重的国家之一，同时也是全球27个耐多药结核病流行严重的国家之一。目前我国结核病年发病人数约为130万，占全球发病的14.3%，仅次于印度位居全球第2位。据全国第五次结核流行病学调查结果，我国肺结核患病率虽有所下降，但耐多药结核病例的危害却日益凸显。而控制耐药、控制结核传播的关键就是早期准确诊断。

人结核病的致病菌包括人型结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、鼠分枝杆菌、M.cannettii等，这些分枝杆菌统称为结核分枝杆菌复合体。其中，人型结核分枝杆菌是引起人类结核病的主要病原体，约占90%～95%。其次为牛结核分枝杆菌。由于人型结核分枝杆菌对吡嗪酰胺敏感，而牛结核分枝杆菌对其天然耐药，因此鉴定结核分枝杆菌的种类对于结核病的诊断和治疗具有重要意义。

目前结核病的诊断主要依赖于对病原体的检查，常用方法为涂片染色镜检、分离培养、免疫学诊断和基因诊断等。其中，分离培养法是目前诊断结核的金标准，但培养需要4～8周的时间，延误临床诊断与治疗。涂片染色镜检法操作简单，快速，但该法灵敏度低、特异性差。免疫学诊断则由于现有的抗原或抗体与其它微生物存在交叉，导致其特异性较差、假阳性率高。基因诊断快速、灵敏，且利用特异性的DNA片段可以区分结核分枝杆菌复合体内的种类。

目前用于结核鉴定的分子标志物有：16srRNA，IS1081,IS6110，hsp65，IS986，hupB，mtp40，SCAR，缺失区（RD）等。其中，16srRNA，IS1081,IS6110，hsp65，IS986能够特异性鉴定结核分枝杆菌复合体，但不能精细区分结核分枝杆菌复合体内的分枝杆菌种类。HupB能够区分人型结核分枝杆菌和牛结核分枝杆菌，但其区分需要依赖扩增后片段长度的差异。Mtp40旨在鉴定人型结核分枝杆菌，但不能鉴定mtp40缺失的人型结核分枝杆菌(有部分结核分枝杆菌缺失mtp40片段)，也不能有效区分结核分枝杆菌复合体中的田鼠分枝杆菌、非洲分枝杆菌、M.cannettii。SCAR在检测人型结核分枝杆菌时，与非洲分枝杆菌有交叉。而本发明可特异性的鉴别人型结核分枝杆菌与其他分枝杆菌，为人型结核分枝杆菌的鉴定提供了一个特异性强、保守性好的分子标志物。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为人型结核分枝杆菌的鉴定和结核病的诊断提供一种新的选择。

本发明的技术方案是核苷酸mts90，具有如下特征，（a）其序列如SEQ ID NO.1所示；或（b）任何含有（a）中连续15bp以上的核苷酸。

SEQ ID NO.1：

GTGACGCAAACCGGCAAGCGTCAGAGACGCAAATTCGGTCGCATCCGA，斜体所示42bp为非编码区，下划线所示48bp为编码区。

本发明还提供了检测人型结核分枝杆菌的试剂，主要成分为核苷酸mts90。

进一步的，其成分还包括扩增mts90的引物对，引物对的序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5或者SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8中任意一对所示。

本发明还提供了检测人型结核分枝杆菌的试剂盒，包括核苷酸mts90。

进一步的，还包括扩增mts90的引物对，引物对的序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5，或者SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8中任意一对所示。

本发明还提供了核苷酸mts90在检测人型结核分枝杆菌中的用途。

本发明还提供了核苷酸mts90在制备检测人型结核分枝杆菌的试剂中的用途。

本发明还提供了核苷酸mts90在制备检测人型结核分枝杆菌的试剂盒中的用途。