[发明专利]一种产L-谷氨酸氧化酶重组菌株的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种产L-谷氨酸氧化酶重组菌株的构建方法，其特征如下：

1)通过构建重组质粒，将谷氨酸氧化酶基因表达于E.coli BL21中构建重组菌株，该菌株具有产生L-谷氨酸氧化酶的能力；

2)菌株产生的L-谷氨酸氧化酶是包涵体，没有蛋白质活性。

2.根据权利要求1所获得的由重组菌株产生的谷氨酸氧化酶包涵体经过蛋白变性，复性，浓缩，使30％以上的蛋白包涵体恢复活性。

3.根据权利要求2所得到的具有活性的谷氨酸氧化酶，其酶学性质如下：

1)最适pH范围为7.5-9.5；

2)最适温度为30-40℃，重组酶在20-40℃放置12-24h，酶的比活力保持在80％以上；

3)Mn²⁺、Ca²⁺和Mg²⁺对酶的活性有促进作用，酶的比活力分别能提高20％、5％和5％以上，而Fe²⁺、Zn²⁺、Cu²⁺、Ba²⁺和Ag⁺对酶活力有抑制作用，Ag⁺抑制作用显著，使酶的比活力下降到10％以下；

4)外源添加FAD对重组酶的活力没有影响；

5)该重组酶具有底物专一性。

4.根据权利要求1和2得到的具有活性的谷氨酸氧化酶可以将谷氨酸和谷氨酸钠转化生成α-酮戊二酸，转化率大于40％，其转化条件：底物谷氨酸钠浓度为10-25g/L，pH7.5-9.5，30-40℃转化8-16h。