[发明专利]用于鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列、试剂盒及其方法有效
| 申请号： | 201310308711.0 | 申请日： | 2013-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN104263813A | 公开（公告）日： | 2015-01-07 |
| 发明（设计）人： | 严蕾艳;王毓洪;应泉盛;王迎儿;宋慧;张华峰;古斌权 | 申请（专利权）人： | 宁波市农业科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/77 |
| 代理公司： | 宁波诚源专利事务所有限公司 33102 | 代理人： | 袁忠卫 |
| 地址： | 315040 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 鉴定 镰刀 引物 序列 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种用于鉴定茄病镰刀菌的引物序列，其特征在于：上游引物具有序列表中SEQ ID NO:1所述的碱基序列，下游引物具有序列表中SEQ ID NO:2所述的碱基序列。
2.一种检测茄病镰刀菌的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含权利要求1所述的引物。
3.一种鉴定茄病镰刀菌的方法，其特征在于：提取待测样品DNA作为模版，利用权利要求1所述的引物进行PCR扩增反应，PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色，根据凝胶中条带大小判断：若存在347-bp的DNA条带，则检测样品中含有茄病镰刀菌。
4.一种用于鉴定尖孢镰刀菌的引物序列，其特征在于：上游引物具有序列表中SEQ ID NO:3所述的碱基序列，下游引物具有序列表中SEQ ID NO:2所述的碱基序列。
5.一种检测尖孢镰刀菌的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含权利要求4所述的引物。
6.一种鉴定尖孢镰刀菌的方法，其特征在于：提取待测样品DNA作为模版，利用权利要求4所述的引物进行PCR扩增反应，PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色，根据凝胶中条带大小判断：若存在228-bp的DNA条带，则检测样品中含有尖孢镰刀菌。
7.一种用于同时鉴定茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的引物序列，其特征在于：包括三条引物，第一条引物具有序列表中SEQ ID NO:1所述的碱基序列，第二条引物具有序列表中SEQ ID NO:2所述的碱基序列，第三条引物具有序列表中SEQ ID NO:3所述的碱基序列。
8.一种同时检测茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含权利要求7所述的引物。
9.一种鉴定茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的方法，其特征在于：提取待测样品DNA作为模版，利用权利要求7所述的引物进行PCR扩增反应，PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色，根据凝胶中条带大小判断：若存在347-bp的DNA条带，则检测样品中含有茄病镰刀菌；若存在228-bp的DNA条带，则检测样品中含有尖孢镰刀菌。
10.根据权利要求3或6或9所述的方法，其特征在于：所述的PCR反应的扩增体系为：1μL DNA模板（约0.4ng），引物各0.2μmol l－1，dNTP0.2μmol l－1,MgCl22mmoll－1,1×缓冲液，聚合酶1.5U个单位，双蒸水补足至25μL。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述的PCR反应条件为：95℃预变性3min，94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸30s，进行35个循环，最后72℃延伸5min。PCR产物用1.5%的琼脂糖在1×TAE缓冲液中电泳后，用溴化乙锭显色拍照。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于宁波市农业科学研究院，未经宁波市农业科学研究院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201310308711.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
